丹蒌片调节SIRT6/CREB/Nor1信号通路介导自噬对ApoE^(-/-)AS小鼠肝脏脂质沉积的影响及分子机制OA

目的:以沉默信息调节因子6(SIRT6)/环磷酸腺苷反应成分结合蛋白(CREB)/神经元派生孤儿受体1(Nor1)信号通路介导自噬为切入点,探究丹蒌片(DLT)对动脉粥样硬化(AS)小鼠肝脏脂质沉积的影响及分子机制。方法:8只C57BL/6小鼠作为空白组,45只载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠随机分为模型组,DLT低、中、高剂量组(DLT-L、DLT-M、DLT-H组,340、680、1360 mg·kg^(-1)·d^(-1)),辛伐他汀组(2.275 mg·kg^(-1)·d^(-1)),高脂饲料喂养12周建立AS模型,造模同时灌胃给药4周。全自动生化分析仪测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平;微板法检测肝组织TG、游离脂肪酸(NEFA)含量;苏木素-伊红(HE),油红O染色评估肝组织病理学变化;免疫组织化学染色分析SIRT6肝脏表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和Wes全自动蛋白质印迹系统检测SIRT6、Nor1、自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)、自噬相关蛋白5(ATG5)、UNC-51样激酶1(ULK1)等相关mRNA及蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C、AST、ALT水平及肝组织TG、NEFA水平显著升高(P<0.01),血清HDL-C水平显著降低(P<0.01);肝细胞排列紊乱,存在大泡型脂肪变性和弥漫性橘红色脂滴;肝组织磷酸化(p)-CREB、CREB、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)蛋白表达显著降低(P<0.01),SIRT6、Nor1、Beclin1、ATG5、ULK1 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,经不同剂量DLT及辛伐他汀干预后,小鼠肝细胞排列紊乱及脂质沉积有不同程度减轻;血清TC、TG、LDL-C、AST、ALT水平及肝组织TG、NEFA水平明显降低(P<0.05,P<0.01),血清HDL-C水平明显升高(P<0.05,P<0.01);肝组织p-CREB、CREB、LC3Ⅱ蛋白水平上调,SIRT6、Nor1、Beclin1、ATG5、ULK1 mRNA及蛋白水平明显上调(P<0.05,P<0.01)。且DLT干预呈剂量依赖性,高剂量组效果尤为显著。结论:DLT可通过调节SIRT6/CREB/Nor1信号通路激活自噬,改善肝脏脂质沉积,从而防治AS。