六味地黄丸通过CLCF1/NFATc1调控破骨细胞膜融合治疗小鼠绝经后骨质疏松症OA

目的探讨六味地黄丸(LWDHW)通过心肌营养蛋白样细胞因子1(CLCF1)/活化T细胞核因子1(NFATc1)调控破骨细胞膜融合治疗绝经后骨质疏松症(PMOP)的作用机制。方法将C57小鼠分为假手术组、模型组、治疗组,10只/组,去势模拟绝经后骨质疏松症并灌胃六味地黄丸治疗。将RAW264.7细胞分为对照组(空白血清)、模型组(核因子κB受体活化因子配体(RANKL)+空白血清)、治疗组(RANKL+六味地黄丸含药血清),用RANKL诱导为破骨细胞并用六味地黄丸含药血清干预。si-CLCF1慢病毒转染敲低细胞中CLCF1表达,将细胞分为空载体(si-NC)组、si-NC+LWDHW组、si-CLCF1组、si-CLCF1+LWDHW组。骨密度分析系统检测各组小鼠骨密度;抗酒石酸酸性磷酸酶(Trap)染色观察各组破骨细胞和胫骨组织中破骨细胞成熟情况;鬼笔环肽免疫荧光观察计算各组细胞膜融合效率及纤丝状肌动蛋白(F-actin)环形成;实时聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹试验检测各组胫骨组织和细胞中CLCF1、NFATc1、树突状细胞特异性跨膜蛋白(DC-STAMP)、破骨细胞刺激跨膜蛋白(OC-STAMP)和空泡型ATP酶V0结构域2(ATP6V0D2)基因和蛋白表达。结果六味地黄丸治疗可增加PMOP小鼠骨密度,减少破骨细胞成熟,降低破骨细胞融合效率(P<0.05),减少F-actin环形成。与模型组相比,六味地黄丸干预可升高胫骨组织和细胞中CLCF1基因和蛋白表达(P<0.05),降低NFATc1、DC-STAMP、OC-STAMP和ATP6V0D2基因和蛋白表达(P<0.05)。与si-CLCF1组相比,si-CLCF1+LWDHW组六味地黄丸含药血清干预后破骨细胞融合效率下降(P<0.05),F-actin环形成减少,NFATc1、DC-STAMP、OC-STAMP和ATP6V0D2基因和蛋白表达降低(P<0.05)。结论六味地黄丸可通过上调CLCF1表达,下调NFATc1、DC-STAMP、OC-STAMP和ATP6V0D2表达,调节破骨细胞膜融合防治绝经后骨质疏松症。