归肾丸合柴胡疏肝散调控AMPK/mTOR/HIF-1α/VEGFα通路改善肾虚肝郁型卵泡发育不良的机制OA

目的:探讨归肾丸合柴胡疏肝散改善肾虚肝郁型卵泡发育不良(FM)的作用机制。方法:将56只雌性SD大鼠随机分为正常组和造模组,采用慢性不可预知温和应激和雷公藤多苷混悬液灌胃构建肾虚肝郁型FM模型。根据干预措施将造模后大鼠分为模型组、归肾丸合柴胡疏肝散组(以下简称中药组)、AICAR组、中药+AICAR组和克罗米芬组,每组8只。通过旷场和糖水偏好实验评估大鼠肝郁情况,体视镜、HE染色观察卵巢组织形态变化;ELISA法检测血清促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)含量;化学荧光法检测卵巢组织活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,TUNEL染色法检测颗粒细胞凋亡水平,免疫组化法检测Bcl-2、Bax表达水平,Western Blot和Real-time PCR检测卵巢组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子α(VEGFα)蛋白及mRNA表达水平。结果:与模型组比较,中药组及克罗米芬组大鼠移动总距离、中心区域停留时间、直立次数与糖水消耗增加(P<0.05,P<0.01);次级卵泡、成熟卵泡数量显著增加(P<0.05,P<0.01),闭锁卵泡数量显著减少(P<0.01);FSH、LH、ROS、Bax表达水平显著降低(P<0.01),E2、SOD、Bcl-2表达水平显著提高(P<0.01,P<0.05);AMPK蛋白及mRNA表达显著降低,mTOR、HIF-1α、VEGFα蛋白及mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01),AICAR可抑制中药改善上述病理表现。结论:归肾丸合柴胡疏肝散可以改善激素紊乱,抑制氧化应激和颗粒细胞凋亡,缓解肾虚肝郁型FM,其机制与调控AMPK/mTOR/HIF-1α/VEGFα通路有关。