HiBiT标记重组口蹄疫病毒的构建及验证OA
口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)是一种高度传染性的RNA病毒,在我国被列为一类动物疫病,对畜牧业安全构成严重威胁。为建立灵敏、快速的口蹄疫病毒检测体系,本研究基于反向遗传学技术,在FMDV O/BY/CHA/2010株的全长cDNA感染性克隆基础上,构建了HiBiT荧光素酶报告基因标记的重组口蹄疫病毒,并在BSR/T7细胞中成功拯救获得重组病毒。Western blot结果验证了HiBiT蛋白在重组病毒中的正确表达。进一步通过50%组织感染量(TCID_(50))、噬斑试验、生长曲线分析以及遗传稳定性检测,对重组病毒的体外生物学特性进行了系统评估。结果表明,重组病毒在复制能力和致病性方面与亲本病毒无显著差异,且保持良好的生物学特性。此外,本研究构建并筛选获得稳定表达LgBiT蛋白的BSR/T7细胞系。通过LgBiT与HiBiT蛋白的特异性互补结合,实现对病毒感染过程中发光信号的实时检测,建立了一种高灵敏度的病毒检测体系。综上,HiBiT报告基因的引入不影响FMDV的基本生物学特性,并结合BSR/T7-LgBiT细胞系,提供了一种可用于口蹄疫病毒研究和快速检测的工具。
黄园园;郭祥龙;李雪彤;孙世琪;郭慧琛;梁冰;宁章勇;吴金恩
中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,兰州730046 华南农业大学兽医学院,广州510642中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,兰州730046中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,兰州730046中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,兰州730046中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,兰州730046中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,兰州730046华南农业大学兽医学院,广州510642中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,兰州730046
农业科技
口蹄疫病毒感染性克隆HiBiT荧光素酶报告系统
《畜牧兽医学报》 2026 (7)
P.3901-3912,12
甘肃省农业农村厅科技支撑项目(KJZC-2025-10)甘肃省科技计划项目(25JRRA1086,25JRRA1089,24CXNA030)。
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