miR-30a-5p对细胞炎症反应的调控作用及机制OA

目的探讨微RNA(miR)-30a-5p对脂多糖诱导的细胞炎症反应的调控作用及机制。方法将小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系分为对照组、脂多糖组、过表达对照组、过表达组、双过表达对照组、双过表达组。除对照组外,其余5组均使用脂多糖联合ATP诱导建立脓毒症细胞模型;过表达对照组转染模拟物阴性对照质粒,过表达组转染miR-30a-5p模拟物质粒,双过表达对照组同时转染miR-30a-5p模拟物质粒和空载体阴性对照质粒,双过表达组同时转染miR-30a-5p模拟物质粒和白细胞介素(IL)-17A过表达质粒,对照组和脂多糖组不转染质粒。采用5-乙炔基-2''-脱氧尿嘧啶核苷染色法检测细胞增殖能力,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记染色法检测细胞凋亡率,酶联免疫吸附试验法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)、IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,qRT-PCR法检测miR-30a-5p和IL-17A mRNA相对表达量;蛋白质印迹法检测IL-17A蛋白相对表达量。采用双萤光素酶报告基因分析miR-30a-5p与IL-17A的靶向关系。结果与对照组相比,脂多糖组细胞增殖能力、miR-30a-5p相对表达量显著降低,细胞凋亡率和NO、IL-1β、IL-6、TNF-α水平及IL-17A mRNA、蛋白相对表达量均显著升高(均P<0.05);与过表达对照组相比,过表达组细胞增殖能力、miR-30a-5p相对表达量显著提高,细胞凋亡率和NO、IL-1β、IL-6、TNF-α水平及IL-17A mRNA、蛋白相对表达量显著降低(均P<0.05);与双过表达对照组相比,双过表达组细胞增殖能力降低,细胞凋亡率和NO、IL-1β、IL-6、TNF-α水平及IL-17A mRNA、蛋白相对表达量均显著提高(均P<0.05)。双萤光素酶报告基因分析显示,miR-30a-5p与IL-17A具有靶向关系(P<0.05)。结论miR-30a-5p可通过靶向抑制IL-17A表达,促进脂多糖诱导白血病细胞增殖、抑制细胞凋亡,进而减轻细胞炎症反应。