衢枳壳黄酮抑制肝癌的作用和机制研究OA

目的基于网络药理学和体外实验探讨衢枳壳黄酮(TFCH)治疗肝癌的活性成分、潜在靶点和作用机制。方法从本草组鉴和中药分子机制生物信息学注释数据库及文献报道获取TFCH活性成分靶点,从GeneCards、在线人类孟德尔遗传数据库、PharmGKB、治疗靶标数据库和DrugBank数据库获取肝癌疾病靶点,筛选TFCH治疗肝癌的潜在靶点;构建TFCH治疗肝癌潜在靶点的蛋白质相互作用网络并对靶点基因进行基因本体论(GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析;构建活性成分-靶点-通路可视化网络,筛选关键活性成分和核心靶点并进行分子对接。选取人肝癌细胞株HepG2进行体外实验论证,采用细胞计数法检测不同浓度(5、10、20、50、100、200、500μmol/L)柚皮素和橙皮素干预对HepG2细胞存活率的影响。蛋白质印迹法检测柚皮素、橙皮素对HepG2细胞表皮生长因子受体(EGFR)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)蛋白相对表达量的影响。结果共筛选出256个TFCH治疗肝癌的潜在靶点,GO分析显示潜在靶点主要涉及细胞化学应激应答、烯烃类化合物代谢过程和Akt信号传导等生物学过程,PI3K复合物、膜外在成分和膜筏等细胞组成,芳香化酶活性、蛋白磷酸酶结合和蛋白酪氨酸激酶活性等分子功能。KEGG分析显示主要信号通路包括PI3K-Akt信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药信号通路和化学致癌-活性氧途径相关信号通路等。分子对接结果表明TFCH关键活性成分柚皮素、橙皮素与核心靶点磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基1具有较强的结合力。体外实验证实,高浓度(≥50μmol/L)柚皮素和橙皮素均能显著降低细胞存活率,且呈剂量依赖性。同时,柚皮素和橙皮素均能显著下调磷酸化PI3K/PI3K和磷酸化Akt/Akt蛋白相对表达量,且橙皮素还能显著下调磷酸化EGFR/EGFR蛋白表达。结论TFCH的潜在抗肿瘤作用可能与负向调控EGFR-PI3K-Akt信号通路异常活化密切相关,研究可为TFCH治疗肝癌提供理论依据。