山羊副流感病毒3型对MDBK细胞微管骨架的影响OA
旨在探究山羊副流感3型病毒(CPIV3)感染牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney cell,MDBK cell)过程中对细胞骨架的调控作用,重点关注对微管(microtubules,MTs)系统的调控。分别采用干扰MTs和微丝骨架功能的药物诺考达唑(Nocodazole,Noco)和细胞松驰素D(Cytochalasin D,Cyto D)处理MDBK细胞,通过RT-qPCR、TCID50和Western blot评估病毒载量变化;结合激光共聚焦显微技术观察病毒感染24 h后,细胞骨架结构形态的变化及其与病毒的亚细胞定位关系;利用Co-IP筛选与微管蛋白的相互作用的病毒蛋白;通过RT-qPCR和Western blot检测微管蛋白的表达变化;通过RT-qPCR检测dynein、kinesin和末端结合蛋白(end-binding proteins,EBs)mRNA水平的变化。结果发现,Noco和Cyto D分别处理MDBK细胞,药物处理组在入胞和复制阶段病毒含量均显著下降;激光共聚焦检测发现,病毒及其包涵体结构与MTs存在共定位,而与微丝不共定位;通过Co-IP试验,证实CPIV3的N蛋白和P蛋白与微管蛋白存在相互作用;病毒感染过程中,微管蛋白的转录和表达水平,dynein、kinesin、EB2和EB3的转录水平均显著下调(P<0.01)。上述结果表明,CPIV3感染MDBK细胞的过程中,MTs作为细胞骨架的重要组成部分,发挥了重要作用。CPIV3通过促进MTs的聚集,调控MTs自身及其相关蛋白的表达,实现了病毒的高效复制。这为MTs骨架系统在CPIV3感染中的功能研究提供新认识,为抗病毒研究提供了新的视角。
杨蕾蕾;孙敏;张纹纹;程子龙;刘茂军;冯志新;李文良
江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室,南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心,泰州225300江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室,南京210014 南京农业大学动物医学院,南京210095 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心,泰州225300江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室,南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心,泰州225300江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室,南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心,泰州225300江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室,南京210014 南京农业大学动物医学院,南京210095 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心,泰州225300江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室,南京210014 南京农业大学动物医学院,南京210095 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心,泰州225300江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室,南京210014 南京农业大学动物医学院,南京210095 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心,泰州225300
农业科技
山羊副流感病毒3型微管MDBK细胞抑制剂
《畜牧兽医学报》 2026 (7)
P.4032-4041,10
国家自然科学基金(32202789)上海市农业科技创新项目(2024-02-08-00-12-F00011)。
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