一株猪传染性胃肠炎病毒的分离与致病性分析OA

本研究旨在分离并鉴定黑龙江省哈尔滨市地区仔猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的流行毒株,并进一步分析其基因组遗传变异特征与致病性。选取经检测为TGEV阳性的腹泻仔猪小肠组织作为样本,经处理后接种于猪睾丸(testicular,ST)细胞进行病毒分离培养;将细胞培养物进行核酸检测、形态学观察以及间接免疫荧光鉴定;利用RT-PCR扩增并测定该毒株S基因全序列;进一步开展致病性试验。结果表明,接毒后细胞出现脱落、圆缩及折光性增强等典型病变;核酸检测结果显示,TGEV呈阳性,且无常见猪腹泻外源病毒污染;透射电镜下观察到冠状病毒典型形态;间接免疫荧光观察到细胞出现特异性绿色荧光;遗传进化分析表明,该分离株属于Purdue基因型。表明成功分离到1株可在ST细胞上稳定传代的TGEV毒株,命名为TGEVSD。接种该毒株的仔猪可在8~28 h出现水样腹泻和呕吐等临床症状;剖检可见肠壁变薄,肠内容物呈黏稠样或水样。组织病理学观察发现,感染仔猪十二指肠与结肠固有层结构疏松,伴有炎性细胞浸润,十二指肠、空肠及回肠黏膜下层间质明显增宽,组织结构疏散。荧光定量RT-PCR检测感染仔猪排毒量和肠道病毒载量,结果显示,病毒拷贝数在感染后96 h达到峰值,结肠病毒载量最高。综上,本研究成功分离到1株Purdue型TGEV流行毒株,并证实其对仔猪具有较强致病性,研究结果可为该地区TGEV流行情况的监控与防控提供参考依据。