肝微粒体代谢产物导向的前胡角型吡喃香豆素分离及代谢产物结构鉴定OA

鉴定活性成分代谢产物的结构对于阐明中药体内药效物质至关重要。然而,代谢产物对照品难以获得,仅凭借常规手段难以实现代谢产物结构的准确鉴定。本研究建立了以活性成分肝微粒体代谢产物的保留时间和质谱信息为导向的分离策略,即通过液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)追踪,从原药材中定向分离并鉴定目标化合物,将其作为对照品实现肝微粒体代谢产物结构的准确鉴定,进而解析代谢路径。前期研究表明前胡的主要活性成分角型吡喃香豆素(APs)在体内易发生水解反应,本研究选取一对APs同分异构体化合物(+)-白花前胡甲素((+)-PA)与(+)-北美芹素((+)-Pte)为底物,分别与人肝微粒体(HLMs)进行体外孵育,利用LC-MS分别检测到8个(包括3个水解产物和5个氧化产物)和9个(包括5个水解产物和4个氧化产物)代谢产物。基于上述策略,从前胡提取物中定向分离制备得到9个APs,包含4对对映体,分别为(3′S,4′S)-和(3′R,4′R)-前胡香豆素C(1a/b)、(3′S,4′S)-和(3′R,4′R)-前胡香豆素B(2a/b)、(3′S,4′S)-和(3′R,4′R)-3′-当归酰氧基-4′-羟基-3′,4′-二氢邪蒿内酯(3a/b)、(3′S,4′S)-和(3′R,4′R)-3′-羟基-4′-当归酰氧基-3′,4′-二氢邪蒿内酯(4a/b)和(3′S,4′S)-isoepoxypteryxin(5)。其中,化合物1b、2b为已知平面结构的新构型。通过与各化学单体进行比对,成功实现了(+)-PA(4个)和(+)-Pte(5个)主要代谢产物的准确鉴定,更揭示了水解、氧化反应及酰基迁移为APs的主要代谢途径。综上,该策略不仅实现了前胡APs的高效分离及(+)-PA和(+)-Pte系列代谢产物结构的准确鉴定,更阐明了APs的主要代谢途径,为中药代谢产物结构的准确鉴定和对照品的获取提供了有效方法。