鉴别布鲁菌感染与免疫的Bp26单克隆抗体阻断ELISA方法的建立与应用OA
为建立一种可鉴别布鲁菌疫苗免疫与野毒感染的血清学方法,基于布鲁菌外膜蛋白Bp26及其HRP标记的单克隆抗体(HRP-m Ab),建立并优化了阻断ELISA。经系统优化,确定最佳反应条件为:Bp26包被量为250 ng/孔,0.1 mol/L pH 9.6碳酸盐缓冲液稀释,4℃包被12 h,30 g/L BSA封闭1 h,待检血清37℃孵育1 h,HRP-m Ab(1∶2000)37℃孵育30 min,TMB显色15 min,以阻断率≥37.55%作为阳性判定标准。该方法与金黄色葡萄球菌、小肠结肠炎耶尔森菌、大肠杆菌O157∶H7、大肠杆菌O78、沙门菌、李斯特菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌阳性血清无交叉反应,批内与批间变异系数均低于10%,具有良好的特异性和重复性。使用195份临床血清验证,其与虎红平板凝集试验、商品化布鲁菌c ELISA试剂盒及商品化Bp26-ELISA试剂盒的符合率分别为96.36%、98.79%和92.82%。结果表明,所建立的阻断ELISA方法性能稳定、结果可靠,可为布鲁菌疫苗免疫与野毒感染的鉴别诊断提供有效技术手段。
马春慧;罗意;吕皓晴;牟雪梅;刘立元;郑福英;李永清;储岳峰;周沛;许健
华南农业大学兽医学院,广东广州510642华南农业大学兽医学院,广东广州510642中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州730046北京市农林科学院畜牧兽医研究所,北京100193中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州730046华南农业大学兽医学院,广东广州510642中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州730046
农业科技
布鲁菌Bp26蛋白单克隆抗体阻断ELISA疫苗免疫与自然感染鉴别
《中国兽医科学》 2026 (7)
P.936-944,9
国家自然科学基金面上项目(32373017)甘肃省科技创新人才计划项目(24RCKA002)甘肃省重点研发计划项目(25YFNA015)中国农业科学院科技创新工程重大科技任务项目(CAAS-ZDRW202410)中国农业科学院科技创新工程科学中心重大任务项目(CAAS-CSAB-202403)。
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