山羊支原体山羊肺炎亚种抗体间接ELISA检测方法的建立与应用OA
旨在建立检测山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)抗体的间接ELISA方法。通过表达纯化获得的Mccp二氢硫辛酸脱氢酶(DLD)蛋白作为包被抗原,通过对反应条件的系统优化,构建间接ELISA抗体检测体系。随后,从特异性、敏感性及重复性等3个关键维度对该检测体系进行全面验证,同时应用该体系开展临床样本的抗体检测工作,以明确其实际应用价值。结果显示,最佳反应条件为:DLD蛋白包被质量浓度800 ng/m L;50 g/L脱脂奶粉溶液37℃封闭2 h;血清1∶20稀释,37℃孵育60 min;HRP标记的家兔抗山羊Ig G 1∶10000稀释,37℃孵育60 min;显色15 min。经统计分析确定该方法的临界值为0.352。与绵羊肺炎支原体、山羊支原体山羊亚种、丝状支原体山羊亚种等病原的阳性血清均无交叉反应。敏感性试验结果显示可检测出1∶64稀释的Mccp阳性血清,检测灵敏度高于山羊传染性胸膜肺炎间接血凝试剂盒(IHA)。批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,与IHA的符合率达86.67%。本研究建立了Mccp抗体间接ELISA检测方法,为Mccp抗体监测和诊断提供新的技术支持。
王梓晴;葛家振;宋国栋;刘一健;高鹏程;谢莹影;郑福英;储岳峰
中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000 新疆农业大学动物医学学院,新疆乌鲁木齐830052中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000 甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州730070中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000 华南农业大学兽医学院,广东广州510642中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000
农业科技
山羊支原体山羊肺炎亚种DLD间接ELISA
《中国兽医科学》 2026 (7)
P.945-950,6
国家重点研发计划项目(2022YFD1800704)甘肃省科技重大专项(23ZDNA007)中国农业科学院重大科技任务项目(CAAS-ZDRW-202410)甘肃省农业农村厅农业科技支撑项目(KJZC-2024-13)。
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