高效抑制口蹄疫病毒复制的CRISPR/Cas13d系统的构建和应用OA
旨在构建并优化可高效抑制口蹄疫病毒(FMDV)复制的CRISPR/Cas13d系统。首先,将Cas13d蛋白分别融合内质网(ER)、高尔基体及膜锚定信号肽,并结合靶向FMDV 1B和2B基因的高效gRNA;其次,通过脂质体转染细胞,并经嘌呤霉素筛选获得转基因细胞系;最后,利用FMDV感染细胞,通过West ern-blot、RT-qPCR及TCID_(50)等方法检测亚细胞定位系统的抗病毒效果。Western-blot结果证实,成功获得14株具有不同亚细胞定位特征的Cas13d/gRNA稳定表达细胞系。病毒感染试验表明,Cas13d-ER/g RNA系统具有显著的抗病毒活性:与对照组相比,RT-q PCR结果显示ER-1B和ER-2B组的病毒m RNA水平分别降低72%和88%。TCID_(50)结果表明,2组病毒滴度分别从对照组的10^(6.00)TCID_(50)/0.1 mL和10^(5.80)TCID_(50)/0.1 mL降至104.86TCID_(50)/0.1 mL和10^(4.70)TCID_(50)/0.1 mL。进一步对定位内质网的Cas13d系统进行单克隆筛选,结果显示ER-2B-2及ER-2B-6单克隆细胞系极显著地抑制病毒复制(P<0.0001)。综上所述,通过亚细胞定位优化可显著提升CRISPR/Cas13d系统的抗病毒效果,为口蹄疫的防控提供了新策略和理论依据。
晏子龙;郑东东;杨彪;郝荣增;齐晓兰;刘宝;谢正杰;闫祯芳;郑海学;孙海亮;冯涛
华南农业大学兽医学院,广东广州510642 中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州730046中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州730046中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州730046中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州730046中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州730046中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州730046中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州730046中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州730046中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州730046华南农业大学兽医学院,广东广州510642中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州730046
农业科技
口蹄疫病毒CRISPR/Cas13d细胞器信号肽转基因细胞系
《中国兽医科学》 2026 (7)
P.892-900,9
甘肃省青年人才项目(2025QNGR26)甘肃省青年科技基金项目(25JRRA444)“十四五”广东省揭榜挂帅项目(2024KJ14)甘肃省科技重大专项(24ZD13NA008)甘肃省研产融合科技攻关赋能计划项目(25FNNA002)。
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