基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS、网络药理学及动物实验探讨舒意宁肠汤治疗腹泻型肠易激综合征作用机制OA

目的明确舒意宁肠汤治疗腹泻型肠易激综合征(IBS-D)的药效物质基础,通过网络药理学及动物实验探讨舒意宁肠汤治疗IBS-D的作用机制。方法运用网络药理学方法获取舒意宁肠汤治疗IBS-D的活性成分、核心靶点及信号通路,将关键活性成分与主要通路的核心靶点进行分子对接。复制IBS-D大鼠模型,借助超高效液相色谱-四极杆轨道离子阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)检测舒意宁肠汤的化学成分和入血成分。将大鼠分为正常组、模型组及舒意宁肠汤高、中、低剂量组,并予相应干预,测定大鼠粪便含水率,通过腹壁撤退反射评估内脏敏感性,免疫组化染色检测结肠组织Occludin、Claudin表达,TUNEL染色检测肠上皮细胞凋亡,Western blot检测结肠组织PI3K、AKT、P-PI3K、P-AKT、Bax、Bcl2蛋白表达。结果网络药理学分析显示,PI3K/AKT通路在舒意宁肠汤治疗IBS-D中发挥重要作用,分子对接显示关键活性成分与该通路靶点AKT1、BCL2具有较强的结合活性。UHPLC-Q-Orbitrap HRMS鉴定出舒意宁肠汤化学成分171个,入血成分15个。动物实验结果显示,舒意宁肠汤可降低IBS-D模型大鼠粪便含水率和内脏敏感性,减少肠上皮细胞凋亡,上调结肠组织Occludin、Claudin表达,上调PI3K/AKT通路P-PI3K、P-AKT、Bcl2蛋白表达,下调Bax蛋白表达(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论舒意宁肠汤通过调节PI3K/AKT通路的关键靶点蛋白表达,增强肠黏膜通透性,降低内脏敏感性,从而治疗IBS-D。