潜阳育阴颗粒调控Sestrin2/Nrf2/NOX4通路抑制细胞焦亡改善高血压肾损害的机制研究OA

目的基于Sestrin2/Nrf2/NOX4信号通路观察潜阳育阴颗粒对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的高血压肾损害小鼠及体外小鼠足细胞细胞焦亡的影响,探讨其改善高血压肾损害的作用机制。方法选取8周龄SPF级雄性小鼠随机分为对照组、模型组、潜阳育阴高剂量组和潜阳育阴低剂量组,每组10只。除对照组外,其余各组均通过皮下植入渗透微泵持续输注AngⅡ[1μg/(kg·min),连续28 d]建立高血压肾损害模型。渗透微泵植入后第3日开始给药,潜阳育阴颗粒高、低剂量组分别予7.8 g/kg(临床等效剂量)、3.9 g/kg潜阳育阴颗粒混悬液灌胃,对照组和模型组予等体积生理盐水灌胃,连续4周。分别于给药前及给药2、4周测量小鼠血压,采用HE染色观察肾组织形态,Masson染色分析肾组织纤维化程度,PAS染色评估肾小球基底膜及系膜基质增生情况,免疫组化染色检测肾组织Sestrin-2、NADPH氧化酶(NOX)4、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)阳性表达。体外实验将小鼠足细胞分为对照组、模型组、缬沙坦组和潜阳育阴颗粒组,对照组及模型组用10%空白血清干预24 h,潜阳育阴颗粒组用10%潜阳育阴颗粒含药血清干预24 h,缬沙坦组用10%缬沙坦含药血清干预24 h,模型组、潜阳育阴颗粒组及缬沙坦组再进行缺氧刺激6 h,Western blot检测上述蛋白表达。结果动物实验显示,与对照组比较,模型组小鼠血压显著升高(P<0.01),肾组织出现明显结构损伤、肾小球基底膜增厚及纤维化(P<0.01),Sestrin2阳性表达显著降低(P<0.01),NOX4、Caspase-1、NLRP3、阳性表达均显著升高(P<0.01),GSDMD阳性表达有升高趋势;与模型组比较,潜阳育阴颗粒高、低剂量组血压显著降低(P<0.01),肾组织损伤和纤维化程度减轻(P<0.01),Sestrin2阳性表达显著升高(P<0.01),NOX4、NLRP3、Caspase-1阳性表达显著降低(P<0.01),GSDMD阳性表达有降低趋势。细胞实验中,缺氧处理导致Sestrin2蛋白表达降低(P<0.05),NOX4、NLRP3、GSDMD蛋白表达升高(P<0.05),Caspase-1蛋白表达有升高趋势,潜阳育阴颗粒可逆转上述变化,恢复各蛋白表达,使其趋于正常(P<0.05)。结论潜阳育阴颗粒可减轻高血压所致肾损害,减轻肾脏炎症反应及纤维化程度,抑制焦亡相关因子Caspase-1、NLRP3和GSDMD表达,其作用机制可能与调控Sestrin2/Nrf2/NOX4信号通路有关。