大菱鲆肠道铜绿假单胞菌的鉴定与特性研究OA

【目的】铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种条件致病菌,在淡水养殖动物上的研究较为系统,而在海水养殖动物上的研究相对较少。本文对分离自大菱鲆(Scophthalmus maximus)肠道的铜绿假单胞菌进行研究,分析其药物敏感性和致病性等,从而为大菱鲆铜绿假单胞菌病的防治提供理论依据和实践指导。【方法】本研究首先通过细菌分离纯化、形态观察、生理生化试验、16S rRNA基因测序以及系统发育树构建对大菱鲆肠道菌进行鉴定,再选择优势菌进行人工回归感染试验、毒力基因检测和药敏试验,进而分析染病大菱鲆的抗氧化酶活力和免疫酶活力变化。【结果】从亚健康大菱鲆中分离得到一株优势菌(Jda),经过革兰氏染色、生理生化鉴定、16S rRNA测序比对和系统发育分析,表明该菌株为铜绿假单胞菌。人工回归感染试验结果表明,在中浓度(3×10^(9)CFU/mL)和高浓度(3×10^(10)CFU/mL)铜绿假单胞菌侵染下,大菱鲆[体质量约(30±1)g]15 d累计死亡率分别为30%和65%;铜绿假单胞菌的半致死浓度(LC_(50))为1.0×10^(10)CFU/mL。切片结果显示,与对照组相比,患病大菱鲆小肠绒毛结构受损,不完整;肝细胞表现为形态不规则、出现大量空泡、细胞核固缩或偏移等明显病理变化。聚合酶链式反应(PCR)鉴定到铜绿假单胞菌含有toxA、lasA、lasB、exoS、exoY、phzM、phzS等16种毒力基因。以上结果表明,铜绿假单胞菌对大菱鲆具有致病力。大菱鲆肝脏过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的抗氧化酶活力和碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)的免疫酶活力变化水平显示,在低浓度(3×10^(8)CFU/mL)和高浓度铜绿假单胞菌侵染下,大菱鲆的CAT酶活力显著低于对照组(P<0.05);低浓度组SOD酶活力显著高于对照组(P<0.05),中、高浓度组SOD酶活力显著低于对照组(P<0.05);中浓度组的ACP酶活力显著低于对照组(P<0.05);3个试验组的AKP酶活力与对照组均无显著差异(P>0.05)。药敏试验结果显示,该菌株对环丙沙星、恩诺沙星较为敏感,对新霉素、多西环素、氟苯尼考、复方新诺明中度敏感。【结论】本研究证实了铜绿假单胞菌对大菱鲆的致病性,虽然大菱鲆体内启动了不同程度的抗氧化和免疫防御机制,但是难以抵抗高浓度铜绿假单胞菌侵染所造成的机体损伤。在确保水产药物使用安全的基础上,环丙沙星、恩诺沙星可作为治疗大菱鲆感染铜绿假单胞菌的有效药物。本研究为大菱鲆铜绿假单胞菌的防控提供支持。