连翘苷调控SphK1/S1P/S1PR1通路对H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞损伤的影响OA

[目的]探究连翘苷(Phi)调控鞘氨醇激酶1(SphK1)/1-磷酸鞘氨醇(S1P)/1-磷酸鞘氨醇受体1(S1PR1)通路对H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞损伤的影响。[方法]采用H_(2)O_(2)诱导H9c2心肌细胞氧化损伤模型,并经过不同浓度Phi分别处理H9c2细胞和H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞,CCK-8检测各组细胞活力,筛选Phi处理浓度。将H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞随机分为H_(2)O_(2)组、连翘苷低剂量组(L-Phi组)、连翘苷中剂量组(M-Phi组)、连翘苷高剂量组(H-Phi组)、连翘苷高剂量+pcDNA-NC组(H-Phi+NC组)以及连翘苷高剂量+pcDNA-SphK1组(H-Phi+SphK1组)。5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡;酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测各组细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放量以及氧化应激相关因子水平;2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光检测线粒体活性氧(ROS)水平;JC-1法检测线粒体膜电位(MMP)变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞增殖、凋亡及SphK1/S1P/S1PR1通路相关蛋白表达。[结果]Phi对H9c2细胞活力无影响(P>0.05);随着Phi浓度升高,H_(2)O_(2)诱导的H9c2心肌细胞活力升高(P<0.05),以5、10、20µmol/L分别处理L-Phi组、M-Phi组、H-Phi组细胞。与NC组相比,H_(2)O_(2)组细胞EDU阳性细胞率、SOD、过氧化氢酶(CAT)、MMP、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达降低,凋亡率、LDH、MDA、ROS荧光强度、Bax、活化的半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶9(Cleaved Caspase-9)、SphK1、S1P、S1PR1表达升高(P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,L-Phi组、M-Phi组、H-Phi组细胞EDU阳性细胞率、SOD、过氧化氢酶(CAT)、MMP、CyclinD1表达升高,凋亡率、LDH、丙二醛(MDA)、ROS荧光强度、Bax、Cleaved Caspase-9、SphK1、S1P、S1PR1表达降低(P<0.05);与H-Phi组、H-Phi+NC组相比,H-Phi+SphK1组细胞EDU阳性细胞率、SOD、CAT、MMP、CyclinD1表达降低,凋亡率、LDH、MDA、ROS荧光强度、Bax、Cleaved Caspase-9、SphK1、S1P、S1PR1表达升高(P<0.05)。[结论]Phi能够减轻H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞损伤,可能与抑制SphK1/S1P/S1PR1通路激活有关。