通脉养心方调控MFN2/PERK信号通路改善缺氧复氧心肌细胞损伤的机制研究OA

[目的]通脉养心方在临床广泛用于治疗冠心病心绞痛。研究旨在探讨通脉养心方调控线粒体融合蛋白2(MFN2)/蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)信号通路改善缺氧复氧(H/R)心肌细胞损伤的作用机制。[方法]预先准备不同浓度的通脉养心方提取物,利用H9c2心肌细胞建立H/R模型,通过噻唑蓝(MTT)法确定通脉养心方乙醇提取物的最佳浓度;采用透射电镜(TEM)、Mito Tracker探针观察线粒体结构;JC-1染色观察线粒体膜电位改变;腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)检测线粒体能量;Seahorse XF细胞能量代谢仪检测线粒体呼吸功能;采用荧光探针DCFHDA检测细胞内活性氧(ROS)水平;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测MFN2/PERK通路关键基因和凋亡相关因子的表达。[结果]结果显示,与模型组相比,通脉养心方给药干预后可显著改善H9c2心肌细胞缺血再灌注损伤(MIRI),降低ROS水平,改善线粒体结构损伤程度,增加细胞内ATP含量,升高线粒体膜电位水平,升高H9c2心肌细胞基础呼吸率、最大呼吸率和ATP合成含氧量;同时上调MFN2、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的基因和蛋白表达水平,并下调PERK、真核翻译起始因子2α(eIF2α)、激活转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)的基因和蛋白表达水平,在低、中、高3种剂量通脉养心方组中,高剂量组的结果尤为显著。[结论]研究结果表明,通脉养心方可能通过MFN2/PERK信号通路发挥抗心肌细胞线粒体损伤的作用。