子午流注纳子法电针对慢性阻塞性肺疾病肺气虚证模型大鼠肺组织BMAL1蛋白及NETs标志物的影响OA

目的从脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1(BMAL1)及中性粒细胞胞外陷阱(NETs)角度探讨子午流注纳子法电针治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺气虚证的可能作用机制。方法实验分两阶段进行。在疗效观察部分将24只大鼠随机分为对照1组、模型1组、子午电针1组、常规电针组,每组6只。采用烟熏联合气管滴注脂多糖(LPS)法建立COPD肺气虚证大鼠模型。造模成功后,子午电针1组大鼠于卯时(5:00—7:00)取“太渊”“肺俞”“足三里”行电针治疗,每次30 min,隔日1次,持续14天,共7次;常规电针组大鼠采用相同电针处理,于白天随机工作时段(8:00—18:00)施治。检测肺功能指标[包括第0.3秒用力呼气容积(FEV_(0.3))、用力呼气肺活量(FVC)、FEV_(0.3)/FVC],HE染色观察肺组织病理,检测大鼠血浆中炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,检测肺组织活性氧(ROS)含量、BMAL1蛋白水平及NETs标志物[髓过氧化物酶(MPO)、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、瓜氨酸化组蛋白H3(CitH3)]表达。在机制验证部分将36只大鼠分为对照2组、模型2组、子午电针2组、过表达空载组、过表达组、过表达子午电针组,每组6只。过表达组、过表达子午电针组大鼠于造模第5周向气管滴注100μl过表达Bmal1腺病毒载体悬液,过表达空载组大鼠则于相同时间点向肺部注射等滴度、等体积的不包含Bmal1基因序列的空载病毒液。子午电针2组和过表达子午电针组电针干预方法同前。检测各组大鼠肺组织MPO、NE、CitH3水平。结果与对照1组比较,模型1组FEV_(0.3)、FVC、FEV_(0.3)/FVC降低,IL-1β、TNF-α水平及ROS含量升高,BMAL1蛋白表达水平下调,MPO、NE、CitH3水平均升高(P<0.05);扫描电镜可观察到典型的NETs样结构,纤维网络表面可见少量颗粒状物质;HE染色显示肺泡结构破坏伴炎性浸润。与模型1组比较,子午电针1组与常规电针组上述指标均显著改善,且以子午电针1组改善最显著(P<0.05)。子午电针1组的NETs样结构减少及肺组织病理改善亦较常规电针组显著。机制验证结果显示,与模型2组比较,子午电针2组、过表达组及过表达子午电针组MPO平均光密度值及MPO、NE、CitH3蛋白水平均显著降低(P<0.05),且过表达子午电针组低于子午电针2组(P<0.05)。结论子午流注纳子法电针可能通过上调肺组织生物钟蛋白BMAL1表达,抑制NETs在肺组织的过度积累,从而发挥对COPD肺部炎性的改善作用。