对虾致玻璃苗弧菌多克隆抗体制备与胶体金免疫层析试纸条的研制OA

致玻璃苗弧菌(Vibrio spp.causing TPV,V_(TPV))是近年来严重威胁对虾养殖业的玻璃苗弧菌病重要病原之一,本研究主要开展了V_(TPV)多克隆抗体的制备及免疫学特性评价,并研制了V_(TPV)胶体金免疫层析试纸条,为V_(TPV)的早期监测与快速诊断提供了一种新的技术手段。实验采用V_(TPV)灭活菌免疫兔制备V_(TPV)的多克隆抗体,并建立间接ELISA检测体系以对抗体性能进行系统评价。交叉反应实验结果表明,该抗体对V_(TPV)具有最强识别能力(P/N=18.65),对副溶血弧菌和溶藻弧菌分别产生38.39%和27.06%的交叉反应率,对嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、维氏气单胞菌及假单胞菌等其他常见水产病原菌均未出现明显反应,表明该抗体在弧菌属内部存在一定程度的交叉识别,但整体仍具有较好的检测特异性。在获得具有较高反应活性的多克隆抗体基础上,进一步构建了V_(TPV)胶体金免疫层析试纸条,并对其检测性能进行了系统评价。通过对不同浓度菌悬液进行梯度检测,确定该试纸的最低可见检出限为1.0×10^(4)CFU/mL。特异性实验结果显示,试纸条对V_(TPV)呈现强阳性反应(L4.5~L5),而对副溶血弧菌和溶藻弧菌仅表现为较弱显色(L1.5~L2),对嗜水气单胞菌、气单胞菌属其他菌株、假单胞菌等菌株均未出现明显反应。稳定性实验结果表明,该试纸在180 d储存周期内检测性能总体保持稳定。进一步通过与qPCR分子检测技术对临床真实样本(n=119)进行平行比对,结果显示该试纸条的诊断特异度高达100.00%,总符合率为96.64%,与qPCR结果的Kappa值达0.86。综上所述,本研究建立了胶体金免疫层析快速检测技术,实现了对致玻璃苗弧菌的快速可视化检测。