Mini-Tn10介导的致病性嗜水气单胞菌溶血能力差异突变株的表型分析OA

为构建致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)突变体库并剖析溶血能力存在差异的突变株的表型特征,本实验采用双亲本接合的方式,把Mini-Tn10-Km2片段随机插入致病性嗜水气单胞菌的基因组中,随后利用含卡那霉素(Km)的TCBS选择性培养基,对突变株(Km^(R) Amp^(S))展开筛选,结合PCR方法对突变株进行Km基因筛查,构建不同基因位点随机插入突变的嗜水气单胞菌突变体库。借助羊血平板筛选溶血表型改变的菌株,并检测这些菌株的生长曲线、药敏情况、胞外酶活性、生物膜形成能力以及运动能力。结果显示:本实验成功构建了包含6030株嗜水气单胞菌突变株的突变体库,并获得了9株溶血表型变化稳定的菌株(其中3株溶血能力增强,6株溶血能力减弱)。这9株突变株在生长速率、胞外酶活性、生物膜形成能力以及运动能力上与野生株存在显著差异,其溶血活性与运动性和生物膜形成能力存在协同变化趋势,提示毒力性状间存在内在调控关联。溶血性增强菌株Tn10-H1的生长速率显著低于野生型菌株,并表现出蛋白酶活性下降,而明胶酶、磷脂酶和淀粉酶活性增强;溶血性减弱菌株Tn10-L2和溶血性增强菌株Tn10-H2生物膜形成能力显著下降,同时与野生型相比,Tn10-L2的运动性、生长速率有所下降。药敏实验结果显示,9株突变株对氨基糖苷类(新霉素和卡那霉素)和氟喹诺酮类(环丙沙星)由高敏感转为耐药,表明转座子插入可能影响了菌株的膜通透性或外排泵系统。