毛竹phe-novel-miR276的克隆和功能分析OA

【目的】探究毛竹新miRNA phe-novel-miR276对木质素合成的调控作用,为毛竹材质改良与分子育种提供理论参考。【方法】采用生物信息学方法分析前期筛选获得的毛竹差异表达的新miRNA(phe-novelmiR276);通过qRT-PCR检测其在毛竹不同组织中的表达模式,计算相对表达量并进行差异分析;克隆phenovel-miR276,构建过表达植物表达载体,经农杆菌介导转化水稻并筛选阳性转基因株系;测定转基因水稻与野生型水稻的木质素含量及POD、SOD活性,对比分析各项指标的组间差异。【结果】1)序列分析表明,phenovel-miR276与miR398家族具有高度同源性,推测其为miR398家族的新成员;2)phe-novel-miR276在毛竹根、茎和叶中均有表达,且根部相对表达量最高;3)间苯三酚染色显示转基因株系茎、叶木质素染色深度变浅,微量法测定木质素含量的结果表明其茎、叶木质素总含量显著降低;4)qRT-PCR检测显示,与野生型水稻相比,转基因株系中phe-novel-miR276的水稻同源靶基因Os10g36848(编码F5H)表达量显著下调。此外,转基因株系POD和SOD活性分别显著高于野生型。【结论】在毛竹中,phe-novel-miR276可通过下调靶向调控木质素合成相关基因的表达发挥调控作用,并间接影响植株抗氧化酶系统活性。