信号素蛋白4D调控中性粒细胞胞外陷阱在类风湿关节炎发病中的机制研究OA

目的探讨信号素蛋白4D(Semaphorin 4D,SEMA4D)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)中对中性粒细胞胞外陷阱(neutrophil extracellular traps,NETs)形成的调控机制。方法选取2022年6—12月在南京大学医学院附属鼓楼医院风湿免疫科住院的RA患者为研究对象,收集其外周血及关节滑液,以健康体检者(healthy control,HC)及骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者作为对照组。分离外周血清、外周血中性粒细胞及滑液,采用ELISA法检测血清及滑液中游离型SEMA4D、NETs标志物(游离核小体、弹性蛋白酶)水平;利用流式细胞仪检测中性粒细胞表面膜结合型SEMA4D的表达水平。分析RA患者血清游离型SEMA4D水平与临床指标的相关性。体外实验采用RA自身抗原瓜氨酸化纤维蛋白原(citrullinated fibrinogen,cFb)刺激健康人的中性粒细胞,观察NETs形成情况;进一步利用基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)抑制剂干预实验及Western blot法检测PKC/PAD4蛋白表达,探讨其潜在分子机制。结果RA患者血清及滑液中游离型SEMA4D水平分别显著高于HC及OA患者(P均<0.05),而RA患者外周血中性粒细胞表面膜结合型SEMA4D的蛋白水平显著低于HC(P<0.05)。RA患者血清SEMA4D水平与C反应蛋白呈正相关(P<0.05)。RA患者体内NETs标志物游离核小体及NE水平分别显著高于HC及OA对照组(P均<0.05)。体外实验证实,cFb可有效诱导NETs形成(P<0.05),该过程伴随SEMA4D的酶切脱落。MMP9抑制剂可逆转SEMA4D酶切及NETs形成,并抑制cFb诱导的PKC/PAD4蛋白表达上调。结论RA患者体内可能存在NETs过度形成及SEMA4D的异常酶切脱落。SEMA4D酶切可激活PKC/PAD4信号通路,促进NETs形成,这一机制可能参与RA的发病过程。