黄芩苷通过抑制铁死亡缓解高糖诱导HK-2细胞损伤的机制研究OA

目的基于铁死亡探讨黄芩苷对高糖诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的保护作用。方法体外培养HK-2细胞,按梯度浓度高糖(10、15、20、25、30、40、60、80 mmol/L)、梯度浓度BA(10、20、30、40、50、60、80、200µmol/L)及梯度浓度高糖联合80µmol/L BA的分组方式,采用CCK-8实验检测细胞活力。后续研究分为对照组(Control组,不作任何处理)、高糖模型组(HG组,30 mmol/L葡萄糖处理)、铁死亡诱导剂组(Era组,1µmol/L铁死亡诱导剂Erastin处理)、高糖联合黄芩苷干预组(HG+80µmol/L BA组,30 mmol/L葡萄糖+80µmol/L黄芩苷),以及激动剂联合黄芩苷组(Era+80µmol/L BA组,1µmol/L Erastin+80µmol/L黄芩苷)。H2DCFH-DA探针法测定活性氧(ROS)水平;化学比色法测定谷胱甘肽(GSH)含量;荧光探针反应测定Fe^(2+)含量;RT-qPCR技术检测与纤维化相关的关键基因表达;Western blot法检测铁死亡相关的关键蛋白,包括谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)以及酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)的表达。结果最终确定利用30 mmol/L葡萄糖干预HK-2细胞,构建肾小管上皮细胞的损伤模型,80µmol/L作为BA的处理浓度。与Control组比较,HG组及Era组细胞内ROS水平、Fe^(2+)含量、纤维化相关基因α-SMA,FN-1,COL1α1,COL4a-1,TGF-βmRNA的表达水平均显著升高(P<0.05,P<0.01)、铁死亡促进蛋白ACSL4的表达水平显著上调(P<0.01),GSH含量、SLC7A11和GPX4的蛋白水平显著下降(P<0.01)。与HG组及Era组比较,Era+80µmol/L BA组及HG+80µmol/L BA组细胞内ROS水平、Fe^(2+)含量、纤维化相关基因α-SMA,FN-1,COL1α1,COL4a-1,TGF-βmRNA的表达水平均显著降低(P<0.01)、铁死亡促进蛋白ACSL4的表达水平显著下调(P<0.01),GSH含量、SLC7A11和GPX4的蛋白水平显著升高(P<0.01)。结论黄芩苷可保护HK-2细胞免受高糖诱导的损伤,其作用机制可能与激活SLC7A11/GPX4通路及调控ACSL4等铁死亡关键蛋白有关。