长链非编码RNA PCGEM1通过miR-642a-5p/LGMN轴对三阴性乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响OA

目的探讨长链非编码RNA PCGEM1(LncRNA PCGEM1)通过miR-642a-5p/天冬酰胺内肽酶(LGMN)轴对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞增殖、凋亡的影响。方法收集41例TNBC组织及癌旁组织。采用RT-PCR法和Western blot法检测组织、人正常乳腺上皮细胞系10A细胞、人TNBC细胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-453、BT-549)的LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p及LGMN蛋白水平。将选择LncRNA PCGEM1、LGMN水平较高、miR-642a-5p水平较低的细胞分为对照组(转染si-NC)、PCGEM1敲减组(转染si-PCGEM1)、miR-642-5p过表达组(转染miR-642-5p mimic)、共转染组(转染si-PCGEM1和miR-642-5p mimic)。CCK-8法检测各组细胞OD值;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;RT-PCR法和Western blot法检测各组LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p、LGMN、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl2)活化的半胱氨酸蛋白酶-3蛋白水平。双荧光素酶报告验证miR-642a-5p与LncRNA PCGEM1、LGMN的靶向关系。结果相较于癌旁组织和10A细胞,TNBC组织和人TNBC细胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-453、BT-549)LncRNA PCGEM1、LGMN蛋白水平更高,miR-642a-5p水平更低(均P<0.05);在人TNBC细胞系中,MDA-MB-231 LncRNA PCGEM1、LGMN蛋白最高,而miR-642a-5p最低(均P<0.05)。与对照组比较,PCGEM1敲减组、miR-642-5p过表达组和共转染组24、48、72 h OD值均明显降低,LncRNA PCGEM1、LGMN、Bcl-2明显降低(均P<0.05),细胞凋亡率及miR-642a-5p、Bax、cleaved caspase-3明显增高(均P<0.05)。与PCGEM1敲减组比较,miR-642-5p过表达组24、48、72 h OD值明显降低,Bax、cleaved caspase-3明显降低(均P<0.05),细胞凋亡率及LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p、LGMN、Bcl-2明显增高(均P<0.05)。与PCGEM1敲减组或miR-642-5p过表达组比较,共转染组24、48、72 h OD值明显降低,LncRNA PCGEM1、LGMN、Bcl-2明显降低(均P<0.05),细胞凋亡率及miR-642a-5p、Bax、cleaved caspase-3明显增高(P<0.05)。LncRNA PCGEM1序列中含有与miR-642a-5p互补的核苷酸序列,miR-642a-5p可靶向结合LGMN 3′UTR。miR-642a-5p mimic和野生型载体WT-LncRNA PCGEM1共转染细胞、miR-642a-5p mimic和野生型载体WT-LGMN共转染细胞荧光素酶活性最低,提示LncRNA PCGEM1与miR-642a-5p存在靶向关系,miR-642a-5p与LGMN mRNA存在靶向关系。LncRNA PCGEM1与miR-642a-5p呈负相关(r=-0.551,P<0.001),与LGMN呈正相关(r=0.553,P<0.001);miR-642a-5p与LGMN呈负相关(r=-0.481,P<0.001)。结论沉默LncRNA PCGEM1可上调miR-642a-5p表达,下调LGMN表达,过表达miR-642a-5p可反馈性地下调LncRNA PCGEM1和LGMN,LncRNA PCGEM1可靶向miR-642a-5p/LGMN轴调控TNBC的发生发展,三者之间相互关联。