通窍活血汤含药脑脊液通过抑制血浆纤维蛋白原介导的NLRP3炎性小体活化减轻氧糖剥夺/复糖复氧诱导的神经元损伤OA

目的探讨通窍活血汤含药脑脊液(TQHXD-CSF)对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤小鼠小胶质细胞(BV-2)炎症损伤的修复作用,以及其对共培养体系中神经元(HT22)细胞的保护作用。方法采用Transwell共培养体系,将BV-2细胞与HT22细胞进行共培养;对Transwell小室中BV-2细胞建立OGD/R+FIB损伤模型后,给予TQHXD-CSF干预,下层HT22细胞正常培养。通过倒置显微镜观察各组BV-2细胞形态变化;采用CCK-8法检测各组细胞存活率;流式细胞术分析细胞内活性氧(ROS)含量及细胞凋亡率;CD86/CD206免疫荧光双染法观察BV-2细胞极化表型;透射电镜结合流式细胞术鉴定并定量含纤维蛋白原(FIB)的细胞外囊泡(EVs);Western blotting法检测NLRP3炎性体相关蛋白(NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD)及炎症因子(IL-1β、IL-18)的表达水平;Pull-down实验验证FIB与NLRP3蛋白的相互作用。结果OGD/R+FIB损伤可显著诱导BV-2细胞向M1型促炎表型极化,上调CD86表达水平,增加含FIB的EVs释放,激活NLRP3炎性体通路(P<0.01);进而导致共培养的HT22细胞活力下降、ROS生成增多、凋亡率升高(P<0.01)。TQHXD-CSF干预后,可显著促进BV-2细胞向M2型抗炎表型极化,上调抗炎标志物CD206表达,减少含FIB的EVs分泌(P<0.01);同时可显著抑制BV-2细胞活化介导的HT22细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18的蛋白表达,抑制NLRP3炎性体过度激活,明显改善HT22细胞的炎症损伤及凋亡情况(P<0.01)。Pull-down实验证实,FIB与NLRP3蛋白之间存在直接相互作用。结论TQHXD-CSF可通过抑制OGD/R+FIB损伤后BV-2细胞释放含FIB的EVs,阻断NLRP3炎性体激活介导的炎症反应,对HT22细胞发挥保护作用,为减轻缺血性脑卒中后的神经炎症损伤提供实验依据。