CHIR99021通过抑制GSK-3β/NF-κB信号通路减轻帕金森病小鼠的神经炎症OA

目的探讨CHIR99021抑制GSK-3β/NF-κB通路改善帕金森病神经炎症的作用。方法SH-SY5Y细胞加入1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)(1 mmol/L)培养24 h,构建MPP-PD细胞模型,治疗组SH-SY5Y细胞先经CHIR99021(3μmol/L)预处理2 h,再加入MPP+(1 mmol/L)培养24 h。将野生型(WT)小鼠连续5 d腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)构建MPTP-PD动物模型,治疗组连续7 d腹腔注射CHIR99021,从第3天开始间隔12 h再腹腔注射MPTP,连续注射5 d。以WT型小鼠作对照,通过旷场实验、爬杆实验、疲劳转棒实验评估各组运动行为能力。通过Western blotting和免疫荧光检测CHIR99021在体内和体外抑制GSK-3β/NF-κB通路信号调控NLRP3炎症小体激活和细胞自噬改善帕金森病神经炎症的作用。结果与对照组相比,MPP+-PD细胞模型中,p-GSK-3β(Ser9)的蛋白表达水平下调(P<0.01),而总GSK-3β蛋白量差异没有统计学意义。p-NF-κB p65(Ser536)的蛋白表达水平上调(P<0.01),而总NF-κB p65(Ser536)蛋白量差异没有统计学意义。同时ASC、NLPR3、Caspase-1炎症小体表达上调(P<0.01)。而在MPP++CHIR99021组中,p-GSK-3β、NF-κB及炎症小体蛋白表达下调.与对照组相比,MPTP-PD小鼠模型中,小鼠运动功能下降(P<0.001),脑内TH神经元减少(P<0.01)。黑质部位的p-GSK-3β(Ser9)水平同样降低(P<0.01),总GSK-3β蛋白量变化差异无统计学意义。而p-NF-κB p65(Ser536)水平同样显著升高(P<0.01),总NF-κB p65蛋白量表达变化差异无统计学意义,ASC、NLPR3、Caspase-1炎症小体表达上调(P<0.01)。而MPTP-CHIR99021组较MPTP-PD组相比,p-GSK-3β、NF-κB及炎症小体蛋白表达下调(P<0.01)。结论CHIR99021通过抑制GSK-3β/NF-κB信号通路,显著改善帕金森病(PD)小鼠的运动功能,减轻神经炎症,并激活细胞自噬以维持细胞内环境稳态。靶向GSK-3β可同时调控PD多个关键病理环节,具有作为多功能治疗靶点的潜力。