人乳源乳酸片球菌BPA03的分离鉴定及其抗氧化与抗衰老益生特性评价OA

目的对健康妇女乳汁中分离得到的菌株BPA03进行鉴定,并评价其安全性与益生特性。方法通过稀释平板涂布法和划线分离法在血琼脂培养基和MRS固体培养基上对乳汁中的菌株进行分离纯化和菌落形态观察;采用革兰氏染色鉴别菌株的形态与革兰氏阴阳性;采用BD鉴定卡对菌株BPA03进行生理生化性质的鉴定;结合16S rRNA测序与系统发育分析,对菌株BPA03进行了分子生物学鉴定;采用血琼脂平板检测菌株BPA03的溶血性;采用KB法检测菌株BPA03对抗生素的敏感性;使用生化分析仪检测其发酵液中的乳酸浓度;斑马鱼胚胎急性毒性实验评价其安全性;利用紫外线及D-半乳糖诱导的斑马鱼衰老模型,评价菌株BPA03的益生特性。结果菌株BPA03在MRS培养基上生长良好,菌落呈乳白色半透明、圆形、表面光滑、边缘整齐;该菌革兰氏染色为阳性,球形或卵圆形,多呈单、双或短链状排列,直径0.5~1.0μm。菌株BPA03经形态学、生理生化及16S rRNA系统发育分析,被鉴定为乳酸片球菌。溶血性试验结果显示,该菌在血琼脂平板上无溶血环;药敏试验对青霉素、氨苄西林、万古霉素等测试抗生素均敏感。菌株BPA03成人血培养需氧瓶中35℃培养时,延滞期约2 h,对数生长期为4~12 h,20 h后进入稳定期,在MRS培养基中培养约8 h乳酸产量达到饱和终浓度为23.6 mmol/L。斑马鱼胚胎急性毒性实验表明,即使在10~8 CFU/mL浓度下,胚胎孵化率仍高于95%,LD50>10~8 CFU/mL,无显著急性毒性。在益生功能方面,BPA03在紫外线诱导的斑马鱼光老化模型中,能有效抑制尾鳍损伤并改善光老化;在D-半乳糖诱导的衰老模型中,BPA03能显著降低机体ROS与丙二醛(MDA)含量,提升超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的抗氧化酶活性,并下调促炎细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达水平(与模型组比较,P<0.05)。结论从健康妇女乳汁中分离得到的菌株BPA03被鉴定为乳酸片球菌,其具有良好的益生效应和安全性。