注射用美珀珠单抗关键质量属性的全面表征OACHSSCD

目的全面表征注射用美珀珠单抗的一级结构、翻译后修饰、二硫键连接方式、纯度、高级结构及Fc段功能等关键质量属性,为其质量控制与临床应用提供依据。方法采用超高效液相色谱-质谱联用测定完整分子量、肽图覆盖率、翻译后修饰及二硫键连接方式;采用亲水相互作用色谱-荧光检测-质谱联用分析N-糖型;采用尺寸排阻色谱(SEC)、毛细管电泳(CE-SDS)及分析型超速离心(AUC)评估纯度与聚集状态;采用圆二色谱分析二级结构;采用差示扫描量热法(DSC)测定热稳定性;采用表面等离子共振(SPR)技术测定Fc段与C1q、Fcγ受体及FcRn的亲和力。结果美珀珠单抗完整分子量实测值与理论值一致,氨基酸序列覆盖率达100%。翻译后修饰分析显示,重链C端赖氨酸缺失比例为99.7%,Fc区甲硫氨酸M274氧化比例为11.9%,重链互补决定区附近天冬氨酸D102异构化比例为18.1%。共鉴定出18对二硫键,连接方式符合IgG2亚型特征。N-糖型以G0F、G1F和G2F为主。SEC与CE-SDS测得单体纯度>99.5%,AUC在天然状态下测得单体比例为95.5%。二级结构以β-折叠为主,DSC显示3个特征熔融温度。SPR分析表明,美珀珠单抗与FcRn具有高亲和力(KD=3.35×10^(-8) mol/L)。结论系统阐明了美珀珠单抗的关键质量特征,确证其一级结构与高级结构的正确性,并鉴定出M274氧化与D102异构化为需重点监控的潜在关键质量属性。研究结果为其质量控制标准建立及临床转化提供了关键理化依据,同时为IgG2亚型抗体药物的深度表征积累了研究经验。