基于网络药理学及实验验证探讨荷叶山楂决明子茶改善细胞脂质积累的作用机制OA

目的基于网络药理学和分子对接技术初步探究荷叶山楂决明子茶(Heye Shanzha Juemingzi Tea,HSJT)作用于代谢相关脂肪性肝病(metabolic dysfunction-associated fatty liver disease,MAFLD)的机制,并在细胞水平研究其对细胞脂质积累的改善作用。方法通过TCMSP、SwissTargetPrediction数据库及相关文献获取药物活性成分及相关靶点,从GeneCards、OMIM数据库中检索MAFLD相关靶点,构建药物-成分-靶点网络并筛选出关键成分;绘制PPI网络图,筛选核心靶点,进行GO和KEGG通路富集分析。对HSJT的关键成分与核心靶点及自噬相关靶点进行分子对接并进行可视化。以PA诱导HepG2细胞为模型,MTT法检测HSJT含药血清的细胞毒性;试剂盒检测细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)的含量;油红O染色检测细胞脂质变性;Western blot法检测线粒体自噬关键靶点Pink1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associatedproteinlight-chain-3,LC3)及p62的表达,进一步验证HSJT的药效及机制。结果共筛选出有效成分73个,靶点532个,与MAFLD交集靶点139个;排名前四的核心靶点分别是TNF、PPARγ、AKT1、STAT3;筛选出的关键成分有槲皮素、山奈酚、山楂酸、大黄酚、荷叶碱、黄决明素。KEGG富集通路主要包括活性氧、AMPK信号通路、mTOR及自噬信号通路。分子对接结果显示,HSJT中关键成分与mTOR、Pink1等靶点结合良好。细胞结果表明,HSJT干预可以明显降低PA诱导的HepG2细胞胞内TG、TC含量,改善细胞脂质蓄积;同时上调Pink1、Parkin、LC3Ⅱ蛋白表达,下调p62蛋白表达。结论HSJT调控线粒体自噬相关蛋白表达,减少HepG2细胞的脂质积累。