芪术柔肝颗粒通过抑制肝窦内皮细胞毛细血管化进而改善肝纤维化的机制OA

目的观察芪术柔肝颗粒对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化模型小鼠的抗纤维化作用及其对肝窦内皮细胞(LSECs)毛细血管化水平的影响并探讨其作用机制。方法C57BL/6J雄性小鼠腹腔注射CCl4橄榄油混合液7周,制备肝纤维化小鼠模型。检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)及蛋白含量;采用肝组织HE染色、Masson染色检测小鼠肝损伤程度及肝纤维化程度。免疫组化法检测Ⅰ型胶原(COL1)、Ⅲ型胶原(COL3)、羟脯氨酸(Hyp)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。透射电镜观察小鼠肝组织肝窦内皮细胞的结构和形态变化。采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)和Western Blot法检测CD31、CD34、CD105和Ⅳ型胶原(COL4)表达。结果芪术柔肝颗粒可明显减少由CCl4诱导的肝纤维化模型小鼠的胶原纤维增生及肝窦内皮细胞毛细血管化。与模型组比较,芪术柔肝颗粒组纤维化评分明显降低(P<0.05),毛细血管化标志蛋白CD31、CD34、CD105、COL4的表达均明显下调(P<0.05,P<0.01,P<0.001),透射电镜观察小鼠肝窦内皮细胞线粒体嵴存在,可见明显开放的窗孔,基底膜不连续。同时,芪术柔肝颗粒明显抑制α-SMA的表达(P<0.01,P<0.001)。结论芪术柔肝颗粒对CCl4诱导的肝纤维化模型小鼠具有抗肝纤维化作用,可能与抑制肝窦内皮细胞毛细血管化有关。