补肾化瘀生新方激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进脑梗死后少突胶质细胞增殖分化的机制研究OA

目的探讨补肾化瘀生新方是否通过调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路促进少突胶质细胞(OLs)的增殖分化进而改善大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)大鼠的神经功能。方法将54只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和补肾化瘀生新方组,各组再按3d,7d,14d分为三个亚组,每亚组6只。通过大脑中动脉闭塞术建立MCAO/R模型,术后分别在各时间点进行相应指标评定与取材。Zea-Longa评分法进行神经功能评分;磁共振扫描检测脑梗死灶体积;苏木精-伊红(HE)染色观察缺血侧脑组织病理变化;免疫荧光双标检测缺血侧脑组织5-溴-2’-脱氧尿苷(Brdu)/血小板衍生生长因子受体-α(PDGFR-α)双阳性细胞与少突胶质细胞转录因子2(Olig2)/2’,3’-环核苷酸3’-磷酸二酯酶(CNPase)双阳性细胞,评价OLs的增殖与分化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清转化生长因子-β1(TGF-β1)含量;反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测缺血侧脑组织PI3K、AKT、mTOR mRNA及p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达。结果与模型组比较,补肾化瘀生新方可显著降低MCAO/R大鼠神经功能评分(P<0.05),缩小脑梗死灶体积(P<0.01),改善缺血侧脑组织病理损伤及炎性浸润,增加缺血侧脑组织Brdu+/PDGFR-α^(+)细胞与Olig^(2+)/CNPase+细胞数量占比(P<0.01,P<0.05),升高血清TGF-β1浓度(P<0.01),提高缺血侧脑组织PI3K、AKT、mTOR mRNA(P<0.01,P<0.05)及p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平(P<0.01,P<0.05)。结论补肾化瘀生新方通过调节MCAO/R大鼠血清TGF-β1的表达,改善炎症微环境,激活PI3K/AKT/mTOR信号通路,从而促进OLs的增殖分化,最终改善MCAO/R大鼠神经功能。