培元通脑胶囊中烫水蛭的真伪鉴定研究OA

目的构建烫水蛭的DNA分子鉴定关键技术,并对培元通脑胶囊中该动物药炮制品进行真伪检验。方法采用酚仿抽提法等提取与纯化总DNA,以此为模板并通过特异性引物PWP、PHN、PPM和PWL进行荧光定量聚合酶链反应(qPCR);此外,考察方法的特异性、灵敏度以及重复性,并对培元通脑胶囊中蚂蟥、菲牛蛭、水蛭、光润金线蛭DNA进行检测。结果含水蛭及其伪品的DNA供试品仅与相应的特异性引物扩增后产生荧光信号,且有特定温度单一峰,Tm分别为76.28、77.77、77.47和78.82℃。该方法检测限为1×10~2 copies/μL,重复性良好(CV<3%)。此外,9批市售培元通脑胶囊中1批检出蚂蟥DNA和水蛭DNA,被鉴定为正品;其余8批除了检出含有蚂蟥DNA或水蛭DNA外,还含有菲牛蛭DNA,被鉴定为掺伪品。结论基于qPCR所建立的检测方法具有良好的特异性,且灵敏度极高,可用于鉴定培元通脑胶囊中烫水蛭炮制品成分;同时,为含水蛭炮制品成方制剂的质量监控提供了强有力的检验手段。