诱导性皮肤CD4^(+)T细胞缺失小鼠模型的构建、繁育和基因鉴定OA

目的利用Cre-loxP与白喉毒素受体(DTR)系统,构建并鉴定可诱导的皮肤CD4^(+)T细胞特异性缺失小鼠模型CD4-iDTR,并评价其清除效果与特异性。方法通过杂交繁育获得CD4-iDTR小鼠,并利用PCR技术进行基因型鉴定。将CD4-iDTR小鼠分为未处理组(对照组)与白喉毒素(DT)诱导组。利用流式细胞术对比未处理组的CD4-iDTR小鼠与野生型C57BL/6小鼠基础状态下组织中CD4^(+)T细胞的分布;DT组皮下注射DT诱导CD4^(+)T细胞缺失,评估给药后24 h及一周后皮肤组织与引流淋巴结中CD4^(+)T细胞的清除效率;同时检测皮肤中中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞以及CD11b^(+)免疫细胞的占比,评价模型清除的特异性。结果PCR鉴定证实成功获得基因型正确的CD4-iDTR小鼠。基础状态下,CD4-iDTR小鼠皮肤及引流淋巴结中的CD4^(+)T细胞比例及数量与野生型小鼠差异无统计学意义(P>0.05)。经DT诱导后,CD4-iDTR小鼠皮肤组织中CD4^(+)T细胞比例及数量在24 h、一周后下降(P<0.05);而引流淋巴结中CD4^(+)T细胞未见明显波动。DT处理前后皮肤中中性粒细胞、巨噬细胞及其他CD11b^(+)髓系细胞的占比均无显著改变(P>0.05)。结论成功构建并繁育出CD4-iDTR小鼠模型,实现了对皮肤CD4^(+)T细胞的高效、特异及可诱导性清除,且对皮肤免疫微环境无明显干扰,为皮肤免疫研究提供了理想的实验工具。