Il9基因敲除小鼠的构建和基因型鉴定OA

目的构建C57BL/6N背景的白细胞介素-9(Il9)基因敲除小鼠模型,建立可靠的基因型鉴定方法,为Il9相关免疫机制及疾病研究提供标准化动物模型。方法采用常规基因敲除技术构建Il9基因敲除小鼠品系(C57BL/6N-Il9^(em1Cya));优化鼠尾DNA提取方法以保障模板质量;设计2组特异性引物(F1/R1、F1/R2),通过PCR技术扩增目的片段,结合琼脂糖凝胶电泳判读小鼠基因型,其中F1/R1引物针对敲除序列(预期产物465 bp),F1/R2引物针对野生型序列(预期产物703 bp)。随后采用Western blot技术针对主要免疫细胞及关键脏器验证后代小鼠中Il9基因的敲除效果,并使用流式细胞术针对主要免疫细胞检测Il9基因的敲除对免疫系统功能是否有影响。结果成功繁育并鉴定了Il9基因敲除小鼠,PCR鉴定结果显示,纯合子(-/-)仅出现465 bp条带,野生型(+/+)仅出现703 bp条带,杂合子(+/-)同时出现两条条带;同时Western blot检测结果显示,子代小鼠各脏器中IL-9表达显著降低(P<0.001),流式细胞术结果显示Il9基因敲除对外周血淋巴细胞、脾脏淋巴细胞、腹腔巨噬细胞比例无明显影响。结论成功构建C57BL/6N背景的Il9基因敲除小鼠模型,建立的PCR基因型鉴定体系高效、精准,可有效区分不同基因型小鼠,为后续Il9功能研究及相关疾病机制探索提供稳定可靠的实验基础。