草质素对脑缺血再灌注损伤模型小鼠神经功能的保护作用及其机制OA

目的探讨草质素(HBT)对短暂性大脑中动脉栓塞(transient middle cerebral artery occlusion,tMCAO)致脑缺血再灌注(I/R)损伤模型小鼠神经功能的保护作用及其机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为A、B、C组,分别进行假手术、tMCAO模型构建及tMCAO模型构建+HBT处理(小鼠腹腔注射HBT 30mg/kg)。处理24h后对小鼠进行改良神经损伤严重程度评分(mNSS)以评估小鼠神经功能受损程度,采用TTC染色法测定各组小鼠脑梗死体积百分比,采用RT-qPCR技术检测缺血区域脑组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)和IL-6 mRNA的表达水平。通过免疫荧光染色技术使用抗Iba-1抗体标记脑组织的小胶质细胞以评价其活化状态。将BV-2小胶质细胞分为a~f组,a~c组分别进行常规培养、氧糖剥夺/复氧(OGD/R)处理和OGD/R+HBT处理,d~f组分别进行常规培养、脂多糖(LPS)处理以及LPS+HBT处理,采用RT-qPCR技术检测a~f组BV-2细胞中炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平,采用Western blot实验检测a~c组BV-2细胞中NF-κB P65(P65)和phospho-NF-κB P65(p-P65)的表达水平。结果与B组小鼠相比,C组小鼠的mNSS分值、脑梗死体积百分比及TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA的表达水平显著降低(F=15.20~249.10,t_(LSD)=4.71~12.93,P<0.05)。与B组小鼠相比,C组小鼠小胶质细胞Iba-1相对荧光强度显著降低(F=52.30,t_(LSD)=6.93,P<0.05)。与b组相比,c组细胞炎性因子mRNA的表达明显下降(F=65.42~172.90,t_(LSD)=6.71~11.75,P<0.05);与e组相比,f组细胞炎性因子mRNA的表达明显下降(F=61.34~67.97,t_(LSD)=4.34~7.19,P<0.05);与a组相比,b组细胞的pP65相对表达水平及p-P65/P65比值明显升高,而c组较b组明显下降(F=11.97、12.75,t_(LSD)=3.18~10.44,P<0.05)。结论HBT对脑I/R损伤模型小鼠的神经功能具有保护作用,其机制可能与降低小胶质细胞P65磷酸化水平抑制NF-κB通路,降低小胶质细胞活性并抑制炎性因子释放,从而缓解神经系统炎症反应有关。