TGF-β信号通过STIM1激活CaMK-Ⅱ/ERK信号通路促进肝癌细胞侵袭转移OA

目的探讨基质相互作用分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)在转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导肝癌细胞侵袭转移中的作用,初步阐明其通过激活CaMK-Ⅱ/ERK信号轴调控肝癌细胞侵袭转移及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的机制。方法以人高转移肝癌细胞株MHCC-97H、LM3为模型,分为TGF-β1重组蛋白处理组与未处理组,分别通过划痕愈合实验、细胞形态学实验验证TGF-β1在肝癌细胞中诱导EMT的效应。采用慢病毒感染技术构建STIM1沉默MHCC-97H、LM3细胞株(shRNA-STIM1组),并设相应阴性对照组(shRNA-Ctrl组)。在TGF-β1诱导下,采用Transwell、划痕愈合实验观察细胞侵袭迁移能力,采用Western blot、免疫荧光检测EMT相关蛋白表达,以高通量转录组测序进行差异基因的KEGG通路富集分析。结果经TGF-β1蛋白处理后,肝癌细胞MHCC-97H、LM3的迁移能力均显著增强(均P<0.01),形态呈间质样改变。shRNA-STIM1组STIM1蛋白表达较shRNA-Ctrl组显著降低(均P<0.01),经TGF-β1诱导后,其细胞侵袭、迁移能力显著弱于shRNA-Ctrl组(均P<0.05),且E-cadherin表达上调、N-cadherin表达下调(均P<0.05),细胞形态未出现间质样转变。转录组测序筛选出差异基因共608个,其中上调基因493个,下调基因115个;KEGG通路富集分析显示,shRNA STIM1组的下调基因富集于MAPK信号通路中。Western blot检测显示,与shRNA-Ctrl组相比,shRNA-STIM1组细胞中CaMK-Ⅱ和ERK1/2蛋白的磷酸化表达水平均显著下降(均P<0.05)。结论TGF-β信号通过STIM1激活CaMK-Ⅱ/ERK信号轴驱动EMT进程,进而诱导肝癌细胞侵袭转移。STIM1可能是TGF-β1诱导肝癌细胞侵袭转移的关键调节因子之一,有望成为阻断肝癌侵袭转移的潜在靶点。