调中通脉方通过调控肠道菌群-糖胺聚糖-炎症轴改善ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化OA

目的探讨调中通脉方(CDD)对高脂喂养载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)的改善作用,并阐明其通过调节肠道菌群、糖胺聚糖及炎症通路发挥抗AS效应的分子机制。方法采用雄性ApoE^(-/-)小鼠高脂饲料持续喂养8周构建AS模型,将造模成功小鼠随机分为模型组、模型+CDD 5、10 g·kg^(-1)组和模型+阿托伐他汀5 mg·kg^(-1)组,并设正常C57BL/6J小鼠作为对照组,共给药12周。给药期间,模型组和各给药组小鼠喂养高脂饲料,对照组小鼠喂养普通饲料。通过油红O染色、HE染色观察主动脉病理形态与斑块面积,采用免疫荧光法检测主动脉瓣中α平滑肌肌动蛋白(α⁃SMA)、分化簇68(CD68)及主动脉弓中双糖蛋白(BGN)表达;试剂盒检测血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL⁃C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL⁃C),ELISA检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;试剂盒测定主动脉硫酸化糖胺聚糖(sGAGs)含量;Western印迹法检测主动脉中Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)及其磷酸化、软骨素-4-硫酸基转移酶1(C4ST1)、软骨素合酶1(CHSY-1)和CHSY-2的蛋白表达;通过16S核糖体脱氧核糖核酸测序分析肠道菌群结构变化。结果与对照组相比,模型组小鼠主动脉斑块面积显著增大,坏死核心面积显著增加,主动脉瓣α-SMA及CD68表达显著升高;血清TG、TC、LDL-C及炎症因子TNF-α、IL-6水平显著升高,sGAGs及BGN表达显著增加,TLR4、C4ST1、CHSY-1、CHSY-2蛋白和NF-κB磷酸化水平显著上调,肠道菌群多样性和鼠杆菌属相对丰度显著降低。与模型组相比,CDD 5和10 g·kg^(-1)可显著缩小主动脉斑块面积,显著减少坏死核心面积,显著抑制主动脉瓣中平滑肌标志物α-SMA、巨噬细胞标志物CD68的表达;显著降低血清中TG、TC和LDL-C水平;显著下调血清炎症因子TNF-α、IL-6的表达;显著减少主动脉sGAGs生成和主动脉弓BGN的表达,CDD 10 g·kg^(-1)显著抑制C4ST1、CHSY-1、CHSY-2、TLR4蛋白表达及NF-κB磷酸化;同时,还能显著提高肠道菌群多样性和毛螺菌属的相对丰度。结论CDD可能通过调节肠道菌群结构、抑制BGN介导的TLR4/NF-κB炎症通路激活、降低糖胺聚糖水平,进而改善脂质代谢紊乱与血管炎症反应,发挥抗AS作用。