云南地区奶牛乳腺炎源大肠埃希菌分离鉴定及耐药特征分析OA

为明确云南地区奶牛乳腺炎源大肠埃希菌的流行特征及耐药规律,从该地区规模化奶牛场采集30头乳腺炎患牛的乳样,分离纯化细菌,通过革兰氏染色镜检、细菌生化反应、16S rDNA PCR扩增及基因序列测序分析对分离株进行鉴定,利用药敏试验评估分离株对10种常用抗生素的敏感性,设计合成10种耐药基因扩增引物,经PCR扩增出分离株携带的耐药基因。结果显示:从30份乳样中共分离获得5株分离株(DL-1~DL-5),分离株菌落边缘光滑整齐,呈灰白色、隆起状,血琼脂平板上无溶血现象;革兰氏染色为阴性无芽孢杆菌;生化反应符合大肠埃希菌典型特征;5株分离株均扩增出大小为1500 bp的16S rDNA目的条带,分离株间同源性为98.1%~99.7%,与国内大肠埃希菌参考株同源性达97.4%~100.0%,均确认为大肠埃希菌;5株分离株中,DL-3、DL-4、DL-5进化关系较近,DL-1、DL-2处于不同进化树分支,与国内参考株分支独立;分离株对β-内酰胺类(青霉素、头孢呋辛)及大环内酯类(红霉素)药物完全耐药,对多种临床常用抗生素不敏感;5株分离株均携带β-内酰胺类耐药基因blaTEM-1;仅DL-1株同时携带氨基糖苷类耐药基因aadA1与aadA2。结果表明,云南部分地区奶牛乳腺炎源大肠埃希菌存在明显的遗传分化,耐药性问题突出,临床治疗应结合药敏试验与耐药基因检测结果制定精准用药方案,以有效防控大肠埃希菌所致奶牛乳腺炎。