益气活血法调控IL-33/ST2/IL-1RAP改善鼻黏膜组织重塑干预变应性鼻炎的机制OA

目的基于益气活血法探讨芪丹益肺通窍颗粒(QDYF)通过白细胞介素-33(IL-33)/生长刺激表达基因2蛋白(ST2)/白细胞介素1受体辅助蛋白(IL-1RAP)信号通路改善鼻黏膜组织重塑治疗变应性鼻炎(AR)的机制。方法首先,基于前期网络药理学结果对QDYF治疗AR潜在机制进行预测,筛选关键通路、成分及靶点,利用AutoDock、PyMOL 2.5.5软件进行分子对接。随后,卵清蛋白(OVA)诱导AR大鼠模型进行体内实验验证。将48只大鼠分为6组:空白组,模型组,芪丹益肺通窍颗粒低(QDYF-L,4.04 g·kg^(-1))、中(QDYF-M,8.08 g·kg^(-1))、高(QDYF-H,16.16 g·kg^(-1))剂量组和氯雷他定(0.9 mg·kg^(-1))组,连续干预14 d后观察大鼠症状进行行为学评分,苏木素-伊红(HE)染色观察鼻黏膜形态学变化,马松(Masson)染色观察鼻黏膜组织胶原纤维沉积并计算胶原容积分数(CVF),免疫荧光(IF)检测鼻黏膜E-钙黏蛋白(E-cad)表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清辅助性T细胞2(Th2)细胞因子白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-13(IL-13)及辅助性T细胞1(Th1)细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(INF-γ)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测鼻黏膜转化生长因子-β1(TGF-β1)、IL-33、ST2、IL-1RAP蛋白表达。结果网络预测与分子对接提示,IL-33、ST2、IL-1RAP与QDYF的主要活性成分汉黄芩素、7-甲氧基-2-甲基异黄酮、芒柄花素、柚皮素、豆固醇、β-谷甾醇具有结合能力(结合能<-4.25 kcal⋅mol^(-1))(1 cal≈4.184 J)。体内实验结果表明,与空白组比较,模型组大鼠行为学评分明显升高(P<0.05),鼻黏膜病理损伤加重,胶原纤维沉积增多,CVF明显升高(P<0.05);血清IL-4、IL-5、IL-13及鼻黏膜TGF-β1、IL-33、ST2、IL-1RAP蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而E-cad表达、血清IL-2、INF-γ水平及IFN-γ/IL-4值明显降低(P<0.05)。与模型组比较,QDYF各剂量组及氯雷他定组大鼠行为学评分明显降低(P<0.05),鼻黏膜病理损伤改善,胶原纤维沉积减少,CVF明显降低(P<0.05),明显上调E-cad表达(P<0.05);QDYF-H组及氯雷他定组大鼠血清INF-γ及IFN-γ/IL-4明显升高(P<0.05),血清IL-4、IL-5、IL-13水平及鼻黏膜TGF-β1、IL-33、ST2、IL-1RAP蛋白表达水平明显降低(P<0.05);QDYF-H组大鼠血清IL-2水平明显升高(P<0.05);QDYF-M组大鼠鼻黏膜TGF-β1、IL-33、IL-1RAP蛋白表达明显降低(P<0.05);QDYF-L组大鼠鼻黏膜ST2蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论QDYF可能通过IL-33/ST2/IL-1RAP信号通路,调节Th1/Th2平衡,改善鼻黏膜组织重塑,缓解AR。