基于补肾活血法探讨母胎界面外泌体源miRNA介导通信网络促进胚胎着床的机制OA

目的基于补肾活血法,探讨补肾活血方是否通过调节外泌体(Exo)源性miRNA,影响母胎界面细胞通讯,进而改善肾虚血瘀型胚胎着床障碍。方法动物除空白组外采用羟基脲450 mg·kg^(-1)灌胃10 d,肾上腺素0.3 mg·kg^(-1)持续7 d。米非司酮5.5 mg·kg^(-1)构建肾虚血瘀着床障碍大鼠模型。补肾活血方高、中、低剂量组分别给予7.30、3.65、1.83 g·kg^(-1)药液灌胃,地屈孕酮组予以2.63 mg·kg^(-1)灌胃10 d。干预后苏木素-伊红(HE)染色观察子宫病理变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测黏蛋白1(MUC1)、叉头框蛋白O1(FoxO1)和同源框蛋白A10(HoxA10)的表达水平;细胞实验以原代子宫内膜上皮细胞(EEC)和胚胎滋养层细胞(TC)为研究对象,超离法制备无外泌体含药血清配置完全培养基培养,超离提取细胞上清液中Exo进行交叉培养,48 h后采用划痕实验及Transwell法检测迁移和侵袭能力,并进行EEC来源Exo miRNA测序。结果造模后大鼠子宫内膜菲薄,血管及腺体减少,胞饮突数量减少,补肾活血方能改善大鼠子宫内膜形态,增加胞饮突数量;造模后各组大鼠MUC1、FoxO1、HoxA10的表达均下调(P<0.05),补肾活血方中计量、高剂量干预上升(P<0.05);无Exo含药血清干预后24 h各组细胞补肾活血方组迁徙率、侵袭率显著提高(P<0.01);EEC源Exo测序基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析主要富集于原肠胚形成、神经元分化调控、细胞发育和再生等生物学过程,并通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、FoxO1、Wnt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、肿瘤坏死因子(TNF)等信号通路发挥作用。结论补肾活血方通过调控外泌体源miRNA改善子宫内膜容受性、促进胚胎着床,为开发基于外泌体miRNA的辅助生殖治疗策略提供了潜在靶点,为中医药治疗不孕症提供了新的理论依据。