乳酸菌发酵及添加益生元对大豆蛋白调控肠道屏障和诱导口服耐受的影响OA

[目的]本文旨在研究乳酸菌发酵及益生元添加对大豆蛋白影响肠道屏障稳态及调控免疫耐受的作用。[方法]采用乳酸菌发酵大豆分离蛋白(SPI)制备发酵大豆蛋白(FSPI),分别添加5种益生元:低聚果糖(FOS)、低聚木糖(XOS)、水苏糖(SOS)、低聚半乳糖(GOS)和低聚异麦芽糖(IMO),共发酵制备益生元组样品。通过体内动物试验比较不同样品对肠道屏障稳态的维持作用以及口服免疫耐受的诱导作用。试验分为空白对照组(PBS-)、致敏组(PBS+)和7个耐受处理组(SPI、FSPI、F-FOS、F-XOS、F-SOS、F-GOS和F-IMO)。通过测定组胺、小鼠肥大细胞蛋白酶-1(mMCP-1)以及辅助型T细胞Th1、Th2、Th17型细胞因子评价小鼠的免疫反应性;通过测定肠道组织学、紧密连接(TJ)蛋白表达水平评价小鼠肠道屏障完整性;通过测定调节性T细胞(T_(reg))、树突状细胞表面标志物(CD103、CD80和CD86)以及白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子β(TGF-β)和视黄酸(RA)等免疫耐受相关因子的表达水平评价不同样品的耐受诱导作用。[结果]与PBS+组和SPI组相比,FSPI与益生元处理均可显著下调组胺、mMCP-1、Th2和Th17型细胞因子的表达水平(P<0.05),从而降低小鼠的免疫反应性;益生元处理可显著上调Th1型细胞因子的表达(P<0.05),有效恢复大豆蛋白引发的Th1/Th2向Th2方向偏移的失衡现象;FSPI与益生元处理组的肠绒毛损伤程度均减轻,肠绒毛高度和隐窝深度显著增加(P<0.05),有效缓解了食物过敏导致的肠道绒毛损伤现象,但FSPI处理上调TJ蛋白和诱导免疫耐受的作用较弱;F-XOS处理可显著上调Claudin 1、ZO-1和Occludin mRNA的表达水平(P<0.05)。此外,F-FOS和F-XOS可通过上调耐受细胞因子(IL-10、TGF-β和RA)和CD103的表达,下调CD80和CD86的表达,促进T_(reg)细胞的生成,从而诱导口服耐受。[结论]FSPI可降低小鼠对大豆蛋白的免疫反应性,维持小鼠肠道屏障完整性;添加益生元共发酵物后可进一步诱导口服耐受,F-FOS和F-XOS的效果最佳。