强精片调控Keap1/Nrf2信号通路减轻精索静脉曲张氧化应激损伤的作用及机制OA

目的基于Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路介导氧化应激探讨强精片改善精索静脉曲张(VC)生精功能损伤的机制。方法将10只SD大鼠随机分为空白组和模型组,病理检测验证模型稳定性。将36只SD大鼠随机分为空白组、模型组、强精片低剂量组(0.23 g·kg^(-1))、强精片中剂量组(0.46 g·kg^(-1))、强精片高剂量组(0.92 g·kg^(-1))和迈之灵组(61.7 mg·kg^(-1)),每组6只。通过部分结扎左肾静脉(模拟人类胡桃夹综合征)建立大鼠实验性左侧精索静脉曲张(ELV)模型,按剂量连续灌胃28 d,每天1次。Transwell小室培养法建立大鼠睾丸体外培养模型,使用强精片含药血清(2.3、4.6、9.2 g·kg^(-1))进行干预。显微镜观察左肾形态,千分尺测量左侧精索静脉(LSV)的直径;记录大鼠每周体质量,并称重附睾和睾丸质量;使用苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸组织病理变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞培养上清液中的睾酮和大鼠睾丸组织中的活性氧(ROS)水平;流式细胞分析ROS含量;免疫组织化学染色分析Keap1、Nrf2、3β-羟类固醇脱氢酶(3β-Hsd)、GATA结合蛋白-4(Gata-4)、原癌基因受体酪氨酸激酶(C-kit);透射电子显微镜(TEM)观察组织超微结构;原位末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分析Keap1、Nrf2、谷胱甘肽S-转移酶α2(Gsta2)、谷胱甘肽S-转移酶μ1(Gstm1)、血红素加氧酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(Nqo1)、硫氧还蛋白还原酶1(Txnrd1)的表达。结果与空白组比较,模型组ROS含量、凋亡细胞百分比显著升高(P<0.01),睾酮(T)浓度明显降低(P<0.01),Keap1的mRNA和蛋白表达显著增加(P<0.01),Nrf2、Gsta2、Gstm1、HO-1、Nqo1和Txnrd1的mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,强精片各剂量组ROS含量、凋亡细胞百分比明显降低(P<0.05),Keap1的mRNA和蛋白表达明显减少(P<0.05),Nrf2、Gsta2、Gstm1、HO-1、Nqo1和Txnrd1的mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论强精片改善VC生精功能的机制与调控Keap1/Nrf2信号通路、减轻氧化应激损伤有关。