Lyn/Syk信号轴对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞生物学特性影响及NK细胞杀伤效应的实验研究OA

目的探究Lck/Yes相关的新型蛋白酪氨酸激酶(Lyn)/脾脏酪氨酸激酶(Syk)对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞生物学特性及自然杀伤(NK)细胞介导的DLBCL细胞杀伤效应的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot检测人正常B淋巴细胞系和DLBCL细胞系中Lyn、Syk的表达水平。将SU-DHL-4细胞分为对照组、sh-NC组、sh-Lyn组、sh-NC+oe-Syk组、sh-Lyn+oe-Syk组,qRT-PCR检测细胞中Lyn和Syk的mRNA表达水平,Western Blot检测细胞中Lyn、磷酸化Lyn(p-Lyn)、Syk及磷酸化Syk(p-Syk)的蛋白表达水平,MTT法、克隆形成实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力,乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞对SU-DHL-4细胞的杀伤率,流式细胞术检测细胞凋亡情况及NK细胞中CD107a阳性表达比例,ELISA测定培养上清液中干扰素-γ(IFN-γ)、颗粒酶B(GrzB)、穿孔素(PRF)水平。结果与人正常B淋巴细胞系GM12878细胞比较,DLBCL细胞系TMD-8、OCI-LY3、U2932、SU-DHL-4中Lyn、Syk的mRNA相对表达量及Lyn、p-Lyn、Syk、p-Syk的蛋白相对表达量均上调(t=4.251~13.526,均P<0.05)。与sh-NC组比较,sh-NC+oe-Syk组SU-DHL-4细胞中Syk mRNA相对表达量及Syk、p-Syk蛋白相对表达量均上调,细胞存活率升高,克隆形成数目及迁移、侵袭数目均增加,NK细胞对SU-DHL-4细胞的杀伤率降低,SU-DHL-4细胞凋亡率减少,NK细胞中CD107a阳性细胞减少,上清中IFN-γ、GrzB及PRF水平降低(t=6.215~34.322,均P<0.05)。与sh-NC+oe-Syk组比较,sh-Lyn+oe-Syk组SU-DHL-4细胞中Lyn、Syk mRNA相对表达量下调,Lyn、p-Lyn、Syk及p-Syk蛋白相对表达量下调,细胞存活率下降,克隆形成数目及迁移、侵袭数目均减少,NK细胞对SU-DHL-4细胞的杀伤率升高,SU-DHL-4细胞凋亡率与NK细胞中CD107a阳性细胞也均增加,上清中IFN-γ、GrzB及PRF水平升高(t=8.270~35.029,均P<0.05)。结论Lyn通过激活Syk促进DLBCL细胞增殖、迁移及侵袭等生物学特性,同时降低NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。