绞股蓝皂苷ⅩⅦ经AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路减轻顺铂致急性肾损伤的作用OA

目的探讨绞股蓝皂苷ⅩⅦ(GP-17)对顺铂致急性肾损伤(AKI)模型大鼠肾脏的保护作用及作用机制。方法将42只雄性SD大鼠随机分为空白对照组(Control组),模型组(Cis组),GP-17低、中、高剂量组(Cis+GP-17-L组、Cis+GP-17-M组、Cis+GP-17-H组,10,20,40 mg/kg GP-17),GP-17高剂量+Compound C(CC)组(Cis+GP-17-H+CC组,0.2 mg/kg CC),氨磷汀阳性药对照组(Cis+Amifostine组,200 mg/kg氨磷汀),各6只。除Control组外,其余各组大鼠均于实验第5天单次腹腔注射顺铂16 mg/kg,建立AKI模型。GP-17各剂量组及Cis+GP-17-H+CC组大鼠于实验第1天灌胃相应药物,Cis+GP-17-H+CC组大鼠在每次灌胃GP-1740 mg/kg前30 min腹腔注射CC,Cis+Amifostine组大鼠于实验第5天注射顺铂前30 min单次腹腔注射氨磷汀,其余均灌胃等体积生理盐水,每日1次。检测血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;观察肾组织病理学及肾小管上皮细胞超微结构的变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测线粒体DNA(mtDNA)拷贝数及核呼吸因子1(NRF-1)、线粒体转录因子A(TFAM)、血红素加氧酶1(HO-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素10(IL-10)的mRNA表达水平;采用免疫印迹(Western blot)法检测腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、沉默信息调节因子1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)的蛋白表达水平。结果肾组织病理学和肾小管上皮细胞超微结构观察结果显示,GP-17各剂量组大鼠的肾组织和线粒体损伤程度均减轻,肾小管上皮细胞脱落减少,管型形成受抑。与Cis组比较,Cis+GP-17-L组大鼠的BUN和MDA水平均显著降低(P<0.05);Cis+GP-17-H组大鼠的NRF-1的mRNA表达水平显著升高(P<0.05);Cis+GP-17-M组和Cis+GP-17-H组大鼠的SCr,BUN,MDA水平、肾小管损伤评分均显著降低(P<0.05),SOD和HO-1的mRNA表达水平均显著升高(P<0.05),mtDNA拷贝数均显著增加(P<0.05);Cis+GP-17-L组、Cis+GP-17-M组、Cis+GP-17-H组大鼠的TNF-α和IL-1βmRNA表达水平均显著降低(P<0.05),IL-10和TFAM的mRNA表达水平及p-AMPK/AMPK,SIRT1,PGC-1α蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。Cis+GP-17-H组对上述指标的改善效果与Cis+Amifostine组相近,而CC可逆转高剂量GP-17的肾功能保护作用。结论GP-17对顺铂诱导的AKI模型大鼠的肾功能具有保护作用,其作用机制可能与激活AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路,改善线粒体功能,减轻氧化应激反应和炎性反应有关。