人参-丹参通过TLR4/NF-κB通路抑制炎症减轻阿霉素诱导的心肌损伤OA

探讨人参-丹参(Ginseng Radix et Rhizoma-Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma,GR-SMR)减轻阿霉素(doxorubicin,DOX)诱导心脏毒性机制。首先利用SwissTargetPrediction数据库检索有效成分靶点,筛选DOX心脏毒性(DOX-induced cardiomyopathy,DIC)靶点,采用微生信平台、STRING数据库等查获取GR-SMR治疗DIC的潜在靶点,并行GO和KEGG富集分析。最后,采用2μmol/L DOX处理H9c2细胞,建立心肌损伤模型进行验证,取对数生长期的细胞分为空白组、DOX组、人参-丹参低剂量组(0.5 mg/mL)、人参-丹参中剂量组(1 mg/mL)、人参-丹参高剂量组(2 mg/mL),通过MTT法和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6,最后通过RT-qPCR以及Western blot检测Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)基因和蛋白表达情况。GR-SMR的150个活性成分用于靶点预测,去除重复值后获得了1385个靶点,与DIC交集靶点有578个,KEGG通路分析发现信号通路主要与TNF信号通路、IL-17信号通路、NF-κB信号通路及细胞凋亡等有关,分子对接结果进一步验证GR-SMR有效成分与TLR4、NF-κB具有较高的结合活性。实验结果显示GR-SMR对DIC明显缓解,细胞活力增加(P<0.01或P<0.001);LDH及ROS水平降低(P<0.01或P<0.001);H9c2细胞相关炎症因子明显降低(P<0.05或P<0.001),炎症反应减轻。且GR-SMR显著降低NF-κB mRNA以及TLR4、p-NF-κB蛋白表达(P<0.01或P<0.001),线粒体ROS清除剂(MitoTEMPO)显著降低相关炎症因子及p-NF-κB蛋白表达(P<0.01或P<0.001),说明GR-SMR可以通过抑制线粒体ROS缓解DIC。因此,GR-SMR可通过TLR4/NF-κB通路抑制炎症反应,减轻DOX心脏毒性。