乌鳢水泡病毒G蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备OACHSSCD

为获得具有中和活性的乌鳢水泡病毒(Snakehead vesiculovirus,SHVV)多克隆抗体,根据GenBank数据库公布的SHVV G蛋白基因序列设计特异性引物,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增获得大小为1524 bp的G蛋白胞外区基因片段,构建pET-28a-ΔG重组质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达和Ni-NTA亲和层析纯化后获得高纯度重组G蛋白,用该蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,4次免疫后经眼眶采血获得多克隆抗体。间接酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)结果表明,制备的多克隆抗体效价为1∶102400。免疫印迹(western blot)和间接免疫荧光实验(indirect immunofluorescence assay,IFA)结果表明,该抗体能特异性识别SHVV G蛋白。血清中和实验结果表明,该抗体可显著抑制SHVV的增殖,证明其具有中和SHVV的活性。研究成功制备了能特异性识别SHVV G蛋白并具有中和活性的多克隆抗体,为后续SHVV免疫学快速检测方法的建立和疫苗研制提供了参考。