肉桂醛通过IRAK3/p38 MAPK信号通路抑制巨噬细胞内结核分枝杆菌存活的实验研究OA

目的基于IRAK3/p38 MAPK信号通路探讨肉桂醛(CA)对巨噬细胞内结核分枝杆菌(MTB)存活的影响。方法通过细胞毒性试验(CCK-8)检测CA对巨噬细胞的毒性作用;利用透射电镜观察CA对巨噬细胞形态结构的影响;通过菌落形成单位(CFU)计数评估CA对巨噬细胞内MTB存活的影响;高效液相色谱技术(HPLC)检测巨噬细胞内CA浓度;转录组学测序(RNA-Seq)检测CA处理后MTB感染的巨噬细胞与模型组的差异表达基因;定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测炎症通路TNF-α、IL-1β、IL-6、IRAK3和p38等基因的mRNA水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养上清中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌水平,免疫印迹法(WB)检测炎症通路关键蛋白IRAK3、p38和磷酸化p38的表达水平。结果CCK-8结果显示,30和60μmol/L CA对巨噬细胞无明显毒性作用,透射电镜观察到60μmol/L CA处理后的巨噬细胞形态结构无明显改变。CFU结果显示,CA处理组较模型组菌落数量明显减少,提示CA可抑制巨噬细胞内MTB的存活。HPLC检出巨噬细胞内CA浓度<0.8μmol/L,提示CA进入细胞内直接作用于MTB不是其发挥抗菌作用的主要途径。RNA-Seq富集到CA处理后MTB感染的巨噬细胞与模型组炎症通路的差异表达基因。RT-qPCR结果显示,CA处理组较模型组炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6及炎症通路下游基因p38β表达显著降低,负反馈调节基因IRAK3表达显著升高。ELISA结果显示,CA处理组较模型组炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6分泌显著降低。WB结果显示,CA处理组较模型组IRAK3表达显著升高,磷酸化P38表达显著降低。结论CA能够抑制巨噬细胞内MTB的存活,其机制可能与上调IRAK3表达、抑制p38 MAPK磷酸化,进而降低MTB感染巨噬细胞的TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子分泌相关。