基于TRAF6/NF-κB/STAT3信号通路探讨清肠汤对结肠炎相关性结直肠癌的预防作用OA

目的基于肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)/核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)/信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路,探讨清肠汤对结肠炎相关性结直肠癌(colitis-associated colorectal cancer,CAC)的干预作用及相关机制。方法将90只C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、模型组、美沙拉嗪组(200 mg/kg)、清肠汤低剂量组(9.5 g/kg)、清肠汤中剂量组(19 g/kg)以及清肠汤高剂量组(38 g/kg),每组15只。除空白对照组外,其余组采用氧化偶氮甲烷(10 mg/kg)/葡聚糖硫酸钠(2.5%)联合化学诱导CAC小鼠模型,造模时间11周。自第2周起,各药物组按相应剂量灌胃给药,空白对照组、模型组给予等体积生理盐水。每周记录小鼠体质量变化。第11周处死小鼠,收集血清和结肠组织,测量结肠长度并统计结肠肿瘤数目。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)浓度;蛋白质免疫印迹试验(Western blot,WB)检测结肠组织中Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、TRAF6、磷酸化NF-κB(phosphorylated NF-κB,p-NF-κB)、磷酸化STAT3(phosphorylated STAT3,p-STAT3)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)等炎症相关蛋白,及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)等凋亡相关蛋白水平;免疫荧光法分析结肠组织中TRAF6、p-NF-κB、p-STAT3的表达;PCR法检测结肠组织中IL-6、TNF-α和IL-1β的mRNA水平。体外实验中,以不同浓度清肠汤预处理RAW264.7细胞后,加入脂多糖刺激,CCK-8法检测细胞存活率。ELISA法检测细胞上清液中IL-6、TNF-α及IL-1β的浓度;WB法检测细胞中TLR4、TRAF6、p-NF-κB、p-STAT3、iNOS和COX-2等炎症相关蛋白,以及Cyclin D1、Bcl-2和Bax等凋亡相关蛋白水平。结果清肠汤可改善CAC小鼠结肠异常状态,降低肿瘤发生率(P<0.05,P<0.01);体内外实验均显示,清肠汤能抑制TRAF6/NF-κB/STAT3信号通路,降低IL-6、TNF-α及IL-1β等促炎因子及iNOS、COX-2的表达,并下调Cyclin D1、Bcl-2蛋白,上调Bax蛋白(P<0.05,P<0.01)。结论清肠汤可能通过抑制TRAF6/NF-κB/STAT3信号通路,调节结肠免疫应答,从而抑制肠道炎症并延缓肿瘤进展。