基于IL-17/NF-κB信号通路探讨清燥救肺汤对急性肺损伤小鼠炎症反应和凋亡的影响OA

目的 探讨清燥救肺汤对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠炎症及细胞凋亡的作用。方法 将C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组(0.002 g/kg,腹腔注射)及清燥救肺汤低、中、高剂量组(3.09、6.17、12.34 g/kg,灌胃),每组10只,分别给予相应药物,对照组和模型组灌胃生理盐水,每天2次,连续14 d。末次给药后6 h内,除对照组外,其余各组小鼠腹腔注射2%戊巴比妥(40 mg/kg)麻醉后,气管滴注LPS(5 mg/kg)建立ALI模型。造模24 h后,ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)中IL-17A、TNF-α、IL-6、IL-1β水平;HE染色观察肺组织病理变化并进行病理评分;TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡情况;免疫组化(IHC)及免疫荧光(IF)检测肺组织p-NF-κB p65、Caspase-3、Bax及Bcl-2蛋白表达;RT-qPCR法检测肺组织Caspase-3、Bax及Bcl-2 mRNA表达;Western blot法检测肺组织IL-17A、p-NF-κB p65、p-IκBα、cleaved Caspase-3、Bax及Bcl-2蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组小鼠肺组织存在炎性细胞浸润、肺泡间隔增厚、肺泡实变充血,肺损伤评分升高(P<0.01);肺组织凋亡细胞数量增加(P<0.01);BALF中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17A水平升高(P<0.01);肺组织Caspase3、Bax mRNA及蛋白、p-IκBα、cleaved Caspase-3、IL-17A、p-NF-κB p65蛋白表达升高(P<0.01),Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低(P<0.01)。与模型组比较,清燥救肺汤可改善肺组织病理损伤,降低肺损伤评分(P<0.01);减少肺组织凋亡细胞数量(P<0.01);降低BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17A水平(P<0.05,P<0.01);降低肺组织Caspase3、Bax mRNA及蛋白、p-IκBα、cleaved Caspase-3、IL-17A、p-NF-κB p65蛋白表达(P<0.05,P<0.01),升高Bcl-2 mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论 清燥救肺汤对LPS诱导的ALI小鼠具有预防保护作用,其机制可能与调控IL-17/NF-κB信号通路,抑制炎症反应与细胞凋亡有关。