基于微流控芯片探讨毓麟珠影响早发性卵巢功能不全大鼠卵巢颗粒细胞力学变化及机制的研究OA

目的基于微流控芯片探讨毓麟珠通过调控Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)影响早发性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency,POI)大鼠卵巢颗粒细胞力学变化的机制。方法(1)动物实验:①将18只7~8周龄SD雌性大鼠随机分为正常组、模型组与毓麟珠组,每组6只。除正常组外,其余各组构建去氧乙烯基环己烯(4-Vinylcyclohexene diepoxide,VCD)模型,毓麟珠组给予毓麟珠治疗;②酶联免疫吸附法(ELISA)检测卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、雌二醇(estradiol,E2)、抗缪勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)水平;③马松染色观察卵巢纤维化程度。(2)细胞力学检测:①提取3周龄SD雌性大鼠卵巢颗粒细胞进行培养,随机分为正常组、模型组(VCD模型)、毓麟珠含药血清组(VCD模型+毓麟珠含药血清)和抑制剂组(细胞松弛素B干预);②ELISA检测E2水平;③微流控芯片检测弹性模量;④鬼笔环肽染色观察细胞骨架形态变化;⑤划痕实验检测迁移能力;⑥免疫荧光观察YAP1的定位与表达变化。(3)细胞实验验证:①CCK-8筛选抑制剂适宜浓度;②蛋白质印迹法检测YAP1蛋白表达。结果(1)动物实验:与正常组相比,模型组大鼠血清FSH升高(P<0.05),E2、AMH降低(P<0.05),卵巢结构紊乱,纤维化程度加重;与模型组相比,毓麟珠干预后可缓解上述改变。(2)细胞力学实验:与正常组相比,模型组颗粒细胞E2水平降低(P<0.05)、弹性模量降低(P<0.05)、细胞骨架结构受损(P<0.05)、YAP1核表达下降(P<0.05);与模型组相比,毓麟珠含药血清治疗后可改善上述改变,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)细胞实验验证:与正常组相比,抑制剂组颗粒细胞YAP1表达水平下降(P<0.05),模型组颗粒细胞YAP1表达水平降低(P<0.05);与模型组相比,毓麟珠含药血清治疗后可改善上述改变,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论毓麟珠可能通过促进YAP1核定位与表达改善POI大鼠颗粒细胞的力学变化,从而改善卵巢结构和功能。